Доказательство наличия углевода в яичном альбумине

Реакция на углеводную группировку (нафтоловая проба).

Реакции на белковую часть (биуретовая реакция).

Выделение муцина из слюны.

Гликопротеины.

Определение изоэлектрической точки казеина.

Открытие в гидролизате фосфорной кислоты.

Открытие в гидролизате казеина белкового компонента.

Фосфопротеины.

Типичным представителем фосфопротеинов является казеин молока. При щелочном гидролизе казеин распадается на белок и фосфорную кислоту.

К 0,5 мл гидролизата казеина прибавляют 5 капель 10% раствора гидроксида натрия и по каплям 1% раствор сульфата меди до появления сине-фиолетового окрашивания. Положительная биуретовая реакция доказывает белковую природу казеина.

1 мл гидролизата нейтрализуют 25% азотной кислотой (контроль по индикаторной бумаге) и добавляют 0,5 мл раствора молибдата аммония в азотной кислоте. Через 5 минут осадок белка и продуктов неполного гидролиза белков отфильтровывают. К фильтрату добавляют 0,5 мл 2% раствора гидрохинона и оставляют на 5 минут. Затем добавляют по каплям добавляют 1 мл раствора карбонат-сульфита натрия. Появляется синее окрашивание раствора, обусловленное образованием молибденовой сини.

В пять пробирок приливают из бюретки следующие количества 0,1 н. раствора уксусной кислоты: в первую —0,25 мл; во вторую — 0,5 мл; в третью — 1,0 мл; в четвертую — 2,0 мл и в пятую — 4,0 мл. Из другой бюретки в той же последовательности в каждую пробирку прибавляют 8,75 мл, 8,5 мл, 8,0 мл, 7,0 мл и 5,0 мл воды. После добавления 0,1% раствора казеина в ацетате натрия значения рН в полученных смесях будут равны 5,3; 5,0; 4,7; 4,4 и 4,1 соответственно.

В каждую из пробирок приливают пипеткой по 1 мл раствора казеина и наблюдают за степенью помутнения раствора в них. Там, где помутнение максимально, рН раствора соответствует изоэлектрической точке белка (рН 4,7).

Муцины пищеварительного тракта – гликопротеины, углеводная часть которых представлена мукополисахаридами. Они предохраняют слизистые оболочки от химических, механических, термических воздействий и переваривания протеолитическими ферментами.

В две пробирки собирают по 1 мл слюны и добавляют в каждую по каплям 1% раствор уксусной кислоты до появления сгустков муцина. Осадок муцина в пробирках осторожно промывают водой, придерживая сгусток палочкой.

Для открытия белка в пробирку с осадком муцина добавляют при помешивании 10% раствор гидроксида натрия до растворения сгустка и производят биуретовую реакцию. Положительный результат реакции доказывает белковую природу муцина.

Углеводы муцина обнаруживают нафтоловой пробой (реакция Подобедова - Молиша). Из гексоз под действием серной кислоты образуется оксиметилфурфурол. При взаимодействии его с α-нафтолом образуется окрашенный продукт конденсации.

Во вторую пробирку с осадком муцина добавляют 0,5 мл 1% спиртового раствора α-нафтола, перемешивают и по стенке осторожно наслаивают 0,5мл конц. серной кислоты. На границе раздела жидкостей постепенно появляется фиолетово-красное кольцо.

В пробирку наливают 4 мл разбавленного раствора яичного альбумина, прибавляют 0,5 мл 0,1%-ного раствора α-нафтола, хорошо перемешивают. По стенке осторожно наслаивают конц. серную кислоту. При стоянии на границе раствора наблюдают фиолетовое кольцо.

Контрольные вопросы

1. Какие белки называются сложными

2. Как образуется связь между полипептидной цепью и фосфорной кислотой в фосфопротеинах?

3. Почему для плода, зародыша, новорожденного особую роль играют фосфопротеины?

4. В чем различие между гликопротеинами и протеогликанами?

5. Какие типы связей существуют между углеводными компонентами и белками?

6. Почему гликопротеины менее чувствительны к действию денатурирующих факторов, чем простые белки?

Работа 3. Сложные белки – нуклеопротеины и хромопротеины

Дата добавления: 2015-03-29