Картирование хромосом с помощью метода ДНК-зондов

Использование морфологических вариантов хромосом (транслокаций и делеций) для построения карт хромосом у человека. Картирование с использованием транслокаций и делеций

Получение гибридных соматических клеток, их особенности, применение гибридных соматических клеток для картирования генов у человека.

В 1960 г. Дж. Барски обнаружил, что клетки двух разных видов могут сливаться в культуре, образуя гибридную клетку. Спонтанно такое слияние происходит редко, но если в культуру добавить вещество, способствующее образованию цитоплазматических мостиков (вирус Синдая), то гибридизация происходит чаще.

Синкарион содержит полный набор хромосом, но в дальнейшем хромосомы мыши полностью сохраняются, а хромосомы человека выбрасываются. Через 30 делений в культуре остаются клетки с наборами (40+1) – (40+15).

Здесь работают оба генома, таким образом, можно, сравнивая синтезируемые белки, отличить мышиные от человеческих. Таким образом, мы имеем клетки (40+1), (40+2), (40+3) и т.д. Если каждую из этих культур проанализировать, т.е. какие белки человека в ней синтезируются, то следующим шагом будет нахождение расположения этих генов в хромосоме. Чаще используют клоны.

Хромос.→								α	γ	β
Клон А Клон В Клон С	+ + +	+ - +	+ + -	+ - -	- + +	- - +	- + -	- + +	+ - +	+ + +
								5 хр	2 хр	1 хр

Клоны подобраны так, что каждая хромосома характеризуется своей комбинацией присутствия и отсутствия синтезируемого фермента в клонах. Клоны используют кровь на синтез белков. (белки (α,β,γ)) Этот метод позволяет картировать гены только на уровне привязки хромосомы.

Используется гибрид клетки и хромосома с хромосомными перестановками.

Транслокация – хромосомная перестройка, в ходе которой хромосомы обмениваются участками, причем негомологичными. Было установлено, что три гена локализованы в Х-хромосоме, но в каком месте – неизвестно.

Эти клетки гибридизовались клетками мыши, и далее отобрали выделенный клон, в котором соединились обе перестроенные хромосомы.

Клоны ►	Х/14 14/Х	Х/14	14/Х
ГГФРТ ФКГ Г-6ФД	+ + +	- - -	+ + +

С помощью такого эксперимента попытались выяснить локализацию генов этих ферментов на Х-хромосоме, испытали этих клонов на синтез необходимых ферментов. Был сделан вывод, о том, что гены всех трех ферментов локализованы в длинном плече Х-хромосомы. Для того, чтобы установить последовательность расположения генов в длинном плече использовались клоны клеток с делецией длинного плеча Х-хромосомы.

Клоны ►
ГГФРТ ФКГ Г-6ФД	+ + +	+ - +	- - +	- - -

Были отобраны клоны с делецией длинного плеча различной величины. Затем их использовали на синтезе 3-х ферментов. Выяснили последовательность расположения: 1-ФГК, 2-ГГФРТ, 3-Г-6ФД. Испытывая эти клоны на другие ферменты можно установить последовательность расположения генов.

Дата добавления: 2015-04-24