Дослід 5. Визначення активності амілази сечі за методом Каравея

Принцип методу. Метод базується на колориметричному визначенні залишку нерозщепленого крохмалю за інтенсивністю його забарвлення з йодом. За одиницю діастази сечі прийнята кількість грамів крохмалю, розщепленого амілазою в 1 л сечі за 1 год. У нормі вона дорівнює 20 – 160 г/л×год.

Матеріальне забезпечення: патологічна сеча, субстратно-буферний розчин, основний розчин йоду – 0,1 н, робочий розчин йоду – 0,01 н, 1 н НСl, пробірки, піпетки, водяна баня, ФЕК, водяний термостат.

Хід роботи: Роботу виконують за таблицею. У якості контролю використовують сечу здорової людини. Реактиви подані в мілілітрах.

Реактиви	Контроль	Дослід
Субстратно-буферний розчин
Інкубація у водяній бані 5 хв при температурі 37˚С
Сеча, розведена у 5 разів	-	0,1
Перемішування, інкубація у водяній бані 5 хв при температурі 37˚С
1 н НСl для зупинки реакції	3,9	3,9
Сеча, розведена у 5 разів	0,1	-
Робочий розчин йоду	0,1	0,1

Перемішати, колориметрувати при 630 – 690 нм у кюветі завтовшки 10 мм проти дистильованої води.

Розрахунок: Д = (А_К – А_Д): А_К ´5 ´ 160,

де Д – діастаза (г/л´год); А_К – екстинкція контролю; А_Д – екстинкція досліду; 5 – розведення сечі; 160 – розрахунковий коефіцієнт на 1 мл сечі і 1 год інкубації.

Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. Вважають, що в людини виділення ферментів підшлунковою залозою пропорційне, тому про ферментоутворювальну функцію цього органа можна судити за активністю амілази. Під час приступу панкреатиту рівень амілази починає зростати через 2 – 12 год від початку приступу, досягаючи максимуму через 20 – 30 год (у нормі активність амілази в сироватці крові за методом Сміта-роу – 16 – 40 мг/год·мл). Через 6 – 10 год активність амілази, ліпази, трипсину зростає в сечі, але активність амілази дуже швидко знижується та через кілька днів вже не може слугувати критерієм діагностики. Доступність отримання сечі дозволяє багаторазово повторювати дослідження і виявляти навіть незначні підвищення показників (норма амілази в сечі – до 160 мг/год·мл). Паралельно до наростання ферментемії та ферментурії різко знижується активність панкреатичних ферментів у дуодентальному вмісті. Даний феномен обумовлює застосування під час лікування панкреатитів замісних ферментативних препаратів. До складу сучасного препарату „Креон” входять максимальна кількість ліпази та помірна – панкреатичних протеаз, що забезпечує збереження ліполітичної активності ферменту в дванадцятипалій кишці та максимальну компенсацію мальабсорбції. При цьому забезпечується функціональний спокій панкреоцитів, чим пояснюється зростання зовнішньосекреторної функції підшлункової кислоти після курсового лікування креоном.

Дата добавления: 2015-05-24