Турбидиметрическим методом

Определение белковых фракций сыворотки крови

Принцип метода: основан на том, что фосфатные растворы определенной концентрации осаждают с образованием очень мелкой взвеси различные белковые фракции крови. По степени мутности растворов (установленной с помощью фотоэлектрокалориметра) судят о концентрации различных фракций белков в исследуемом материале.

Ход работы. Фосфатные буферные растворы различных концентраций от 0,5 до 3,0 М разливают в 7 пробирок по схеме:

10 мл воды	5мл буф.1	5мл буф.2	5мл буф.3	5мл буф.4	5мл буф.5	4,5мл буф.1

Затем в 6-ю пробирку добавляют 0,5 мл сыворотки, содержимое перемешивают. В пробирки 1, 2, 3, 4 и 5 переносят из пробирки 6 по 0,5 мл полученной смеси, в пробирку 0 – 1 мл той же смеси. Содержимое пробирок осторожно перемешивают, через 15 мин вновь осторожно перемешивают и измеряют светопоглощение растворов 1-5. Светофильтр № 8 (красный), при длине волны 600 нм, в кювете с толщиной слоя 1,0 см. Фотометрируют против раствора пробирки 0. Одновременно определяют общий белок сыворотки крови биуретовым методом. Расчет и результаты: Е₁, Е₂, Е₃, Е₄, Е₅, Е_{общ. белок.}

белковые фракции	% фракции по отношению к общему белку	норма	Эксперименталь-ные данные	Абсолютное содержание белка фракции
Общий белок	100%	100% (60-80 г/л
Альбумины		56,6 – 66,8
a1 глобулины		3,0 – 5,6
a2 глобулины		6,9 – 10,5
b глобулины		7,3 -12,5
g глобулины		12,8 -19,0

Диагностическое значение анализа: при различных патологических состояниях, как правило, изменяется не общий белок крови, а состояние между белковыми фракциями.

Общий белок сыворотки. Уменьшение белка имеется у новорожденных и при беременности. Увеличивается при длительном пребывании в горах, употреблении пищи, богатой белками.

Гипопротеинемия наблюдается при недостаточном поступлении белка в пищу (недоедание, голодание, опухоли, стеноз пищевода, привратника, нарушение функции желудочно-кишечного тракта), при снижении процессов биосинтеза белка (хронические гепатиты, циррозы печени).

Содержимое альбуминов уменьшается при недостатке белка в пище, нефрозе, воспалительных процессах, циррозе печени, злокачественных новообразованиях, кровотечениях.

Белки острой фазы (a₁, a₂ глобулины) повышаются при острых инфекциях, острых нефрозах, остром ревматизме.

Концентрация b-глобулинов увеличивается при злокачественных новообразованиях, нефрозах, застойной желтухе.

g-глобулины увеличиваются при хронических воспалительных процессах – хроническом полиартрите, циррозах печени.

Контрольные вопросы

1. Что такое плазма крови?

2. Что такое сыворотка крови?

3. Каков химический состав плазмы крови?

4. Перечислить основные белковые фракции плазмы. Каковы количественные соотношения отдельных фракций?

5. Дать определение понятиям диспротеинонемия, гипопротеинемия, гиперпротеинонемия. Причины, их возвышающие.

6. Причины и механизм развития «голодных отеков».

7. Дать краткую характеристику альбуминам крови. Указать молекулярную массу, биологические функции.

8. Белки какой фракции крови вносят наибольший вклад в онкотическое давление крови? Почему?

9. Дать краткую характеристику a₁-глобулиновой фракции.

10. Дать краткую характеристику a₂-глобулиновой фракции.

11. Дать краткую характеристику b-глобулиновой фракции.

12. Дать краткую характеристику g-глобулиновой фракции.

Дата добавления: 2015-07-02