Противовирусный иммунитет. Особенности вирусологического метода диагностики (культивирование, индикация, идентификация вируса)

Особенности вирусологического метода диагностики (культивирование, индикация, идентификация вируса)

Лабораторная диагностика, характер исследуемого материала

Для подтверждения герпетической инфекции важнейшее значе­ние имеет лабораторная диагностика. Исследуемые материалы: содер­жимое пузырьков и герпетических везикул, соскобы роговой оболочки глаз, кровь, ликвор, носоглоточный смыв, моча, сперма, при леталь­ном исходе - мозговая ткань.

Применяют вирусоскопический, вирусологический, серологиче­ский, иммунофлюоресцентный, молекулярно-генетический методы и кожную аллергическую пробу.

Серологический метод по выявлению антител против вируса гер­песа проводится с помощью серологических реакций: РНГА, РСК, ИФА, РИА. Антитела появляются на 4-7 день после начала инфекции и достигают максимального титра через 2-4 недели. Серологические реакции обычно ставят с парными сыворотками: первая проба берет­ся в начале заболевания, а вторая через две недели после первой. Диа­гноз считают подтвержденым при 4-кратном возрастании титров специфических антигерпетических антител.

Вирусоскопический метод используется при характерной обиль­ной везикулярной сыпи на эритематозном основании. Вирусы герпеса вызывают слияния пораженных клеток с образованием гигантских многоядерных клеток (синцитиев) с внугриядерными ацидофильными включениями Каудри (при окраске по Романовскому-Гимзе). Виру­сы герпеса могут быть обнаружены при электронной микроскопии. Недостаток этих двух методов микроскопии - невозможность отдиф­ференцировать ВПГ-1 и ВПГ-2 от вируса ветряной оспы.

Иммунофлюоресцентный метод проводят с моноклональными ан­тителами против вируса герпеса для быстрого обнаружения вирусных антигенов в инфицированных клетках (экспресс-метод диагностики).

Молекулярно-генетический метод направлен на выявление в исследуемом материале ДНК вируса герпеса с помощью полимеразной цепной реакции, ДНК-гибридизации и рестрикционного эндонуклеазного анализа. Также проводится электрофоретический анализ вирусных белков и вирусной ДНК.

Кожная аллергическая проба ставится с герпетическим антиге­ном, вводимым внутрикожно.

Вирусологический метод применяют в острой стадии болезни, он основан на выделении вируса из инфекционного материала путем заражения культур клеток (фибробластов эмбриона человека, Hela и Нер-2) или куриного эмбриона. Вирусы герпеса вызывают ЦПД в куль­турах клеток через 2-4 дня после заражения в виде синцития с включе­ниями Каудри. Для идентификации вируса проводят фиксацию клеток, обрабатывают моноклональными антигерпетическими антителами, коньюгированными с ФИТЦ, микроскопируют в люминесцентном микроскопе, а также используют иммуноферментный анализ и ПЦР in situ. Серологическую идентификацию выделенного вируса осуществляют с помощью реакции нейтрализации со специфически­ми вируснейтрализующими сыворотками.

После перенесенной первичной инфекции форми­руется клеточный и гуморальный иммунитет (антитела классов IgM и IgG), а также местный иммунитет (секреторный IgA на слизистых обо­лочках). Известно, что чем тяжелее течение первичной инфекции, тем выше титр образовавшихся антител. Большое значение в защите от герпетической инфекции имеют и неспецифические факторы проти­вовирусной защиты (натуральные киллеры, интерферон). Однако ан­титела не могут обеспечить защиту от последующих рецидивов инфекции, так как вирус персистирует в нейронах, куда гуморальным факторам защиты нет доступа, и при возникновении условий для ре­активации вируса, вновь возникает рецидив (обострение заболевания).

Дата добавления: 2015-06-27