Производные пиразолопиримидина

ВЭЖХ.

В качестве подвижной фазы используют фосфатный буферный раствор с рН 5,5 – 5,6. Детектируют спектрофотометрическим способом при 254 нм.

На хроматограмме испытуемого раствора сумма площадей пиков гуанозина и гипоксантина не должна более чем в 2,5 раза превышать площадь пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 2,5%); сумма площадей пиков неидентифицированных примесей должна быть не более половины площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,5%).

MERCAPTOPURINUM (MERCAPTOPURINЕ)

6-меркаптопурин

Желтый кристаллический порошок без запаха или почти без запаха.

Практически нерастворим в воде и спирте, растворим в горячей воде, в растворах щелочей, мало растворим в разведенных кислотах.

СИНТЕЗ

Получают их гипоксантина под действием сульфирующего агента пентасульфида дифосфора в среде безводного пиридина:

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. УФ-спектр 0,0004% раствора в 0,1М растворе хлористоводородной кислоты должен иметь максимум поглощения при 325 нм, а в 0,1М растворе гидроксида натрия при 231 и 310 нм.

2. При добавлении раствора нитропруссида натрия в щелочной среде образуется желтовато-зеленое окрашивание, переходящее при подкислении в темно-зеленое.

3. После растворения в аммиаке добавляют хлорид меди (II) и 20% раствор гидроксиламина гидрохлорида; наблюдается выпадение оранжево-желтого осадка.

4. Из растворов в этаноле при добавлении насыщенного спиртового раствора ацетата ртути (II) выпадает белый осадок, а под действием спиртового раствора ацетата свинца – желтый осадок.

5. Проводят реакции с селенистой кислотой (красный осадок), концентрированной азотной кислотой (желтое окрашивание), концентрированной серной кислотой в присутствии этанола и сахарозы (коричневое окрашивание).

ЧИСТОТА

Примесь гипоксантина определяют УФ-спектрофотометрией, используя раствор меркаптопурина в 0,1М хлористоводородной кислоте. Измеряют оптическую плотность этого раствора при 255 и 325 нм относительно растворителя. Отношение оптических плотностей при 255 и 325 нм не должно быть более 1,6. Отношение удельных показателей поглощения при 255 и 325 нм не должно быть более 0,08.

AZATHIOPRINUM (AZATHIOPRINЕ)

6-(1-метил-4-нитроимидазолил-5)-меркаптопурин

Светло-желтый с зеленоватым оттенком кристаллический порошок.

Практически нерастворим в воде, спирте и хлороформе, легко растворим в растворах щелочей, мало растворим в разведенных минеральных кислотах.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом или вазелиновом масле, в области от 3500 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать рисунку спектра азатиоприна представленному в ФС.

2. УФ-спектр 0,001% раствора в 0,1М растворе хлористоводородной кислоты должен иметь максимум поглощения при 280 нм, минимум при 242 нм.

3. Для подтверждения наличия нитрогруппы проводят гидрирование цинковой пылью в присутствии хлористоводородной кислоты. Через 5 минут раствор желтеет. Затем фильтруют и после добавления мочевины проводят реакции диазотирования и азосочетания в фильтрате с помощью нитрита натрия и щелочного β-нафтола; образуется розовый осадок:

ЧИСТОТА

Примесь 6-меркаптопурина (не более 1%) устанавливают ТСХ на пластинках Силуфол УФ-254. Хроматографируют восходящим методом в системе растворителей н- бутанол – этанол – вода (4:1:1). Проявляют парами йода.

На хроматограмме должно быть только одно постороннее пятно, которое по совокупности величины и интенсивности окраски не должно превышать пятно стандартного образца, находящееся на том же уровне.

ALLOPURINOLUM (ALLOPURINOL)

4-гидрокси-4Н-пиразоло[3,4- d ]пиримидин или 8-азагипоксантин

Белый или белый с кремоватым оттенком мелкокристаллический порошок.

Очень мало растворим в воде и спирте, практически нерастворим в эфире и хлороформе, умеренно растворим в диметилсульфоксиде, легко растворим в растворах гидроксидов щелочных металлов.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать рисунку спектра аллопуринола, представленному в ФС.

2. УФ-спектр 0,001% раствора в 0,1М хлористоводородной кислоте должен иметь максимум поглощения при 250 нм и минимум при 231 нм. Отношение оптических плотностей при 231 и 250 нм должно быть в пределах 0,50 – 0,62. По указанным характеристикам устанавливают наличие светопоглощающих примесей.

УФ-спектр0,001% раствора в 0,1М растворе гидроксида натрия должен иметь максимум поглощения при 242 нм и плечо от 276 до 280 нм.

3. С реактивом Несслера (K₂[HgI₄]) в щелочной среде после нагревания до кипения образует желтый хлопьевидный осадок.

ЧИСТОТА

Наличие посторонних примесей (не более 0,2%) устанавливают ТСХ на пластинках со слоем селикагеля F₂₅₄. Хроматографируют восходящим методом в системе растворителей вода – н- бутанол – уксусная кислота (5:4:1). Проявляют в УФ свете при 254 нм.

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

1. За счет основных свойств атомов азота в положении 9 в пурине возможно кислотно-основное титрование в среде неводного растворителя.

Растворитель: ледяная уксусная кислота;

Титрант: титрованный раствор хлорной кислоты (HClO₄);

Индикатор: кристаллический фиолетовый;

f_экв = 1.

Кофеин в неводной среде проявляет наиболее сильные основные свойства, чем другие производные ксантина. Кофеин титруют в среде уксусного ангидрида и хлороформа до желтого окрашивания. Поскольку препарат является кристаллогидратом, то его предварительно высушивают при 80^оС до постоянного веса.

Конечную точку титрования ацикловира определяют потенциометрически.

При титровании теобромина в качестве растворителя используют муравьиную кислоту и уксусный ангидрид (1:10), индикатором служит Судан III.

Пентоксифиллин определяют в смеси уксусного ангидрида и бензола (10:20).

Ксантинола никотинат титруют в смеси уксусной кислоты и уксусного ангидрида (2:18), эквивалентную точку устанавливают потенциометрически со стеклянным индикаторным электродом.

2. Обратная йодометрия основана на способности образовывать периодиды. Этот метод используют при определении кофеина в кофеин-бензоате натрия, которого должно быть в пересчете на сухое вещество не менее 38% и не более 40%.

Добавляют избыток титрованного раствора йода и разведенную серную кислоту. Образовавшийся осадок периодида отфильтровывают. В фильтрате титруют йод, не вступивший в реакцию.

Титрант: титрованный раствор натрия тиосульфата (Na₂S₂O₃);

Индикатор: крахмал. Добавляют в конце титрования и титруют до исчезновения синего окрашивания.

Количество осаждаемых алкалоидов зависит от состава образующегося осадка, рН среды, длительности взаимодействия.

f_экв = ¼ - для кофеина и теобромина.

Меркаптопурин определяют в смеси воды и 30% раствора натрия гидроксида. Точку эквивалентности устанавливают потенциометрически.

3. Для определения бензоата натрия в кофеин бензоате натрия используют ацидиметрию в присутствии эфира для извлечения выделяющейся бензойной кислоты.

Титрант: титрованный раствор кислоты хлористоводородной (HCl);

Индикатор: смешанный – метиловый оранжевый и метиленовый синий (1:1);

Титруют до появления сиреневой окраски в водном слое.

f_экв = 1.

Бензоата натрия в кофеин бензоате натрия в пересчете на сухое вещество должно быть не менее 58% и не более 62%. Поэтому при определении кофеина бензоата натрия в лекарственных формах по бензоату натрия рассчитывают условный титр:

М.м. _{бензоата натрия} = 144,1

0,1 * 144,1

Т = -------------- = 0,01441 (г/мл) - количество бензоата натрия, соответствующее

1000 1 мл 0,1М HCl

0,01441 *100

Т_усл = ------------------ = 0,0232 (г/мл)

Ацидиметрически титруют также этилендиамин в эуфиллине, которого в пересчете на сухое вещество должно быть не менее 14% и не более 18% (в растворе для инъекций 18-22%).

Титрант: титрованный раствор кислоты хлористоводородной (HCl);

Индикатор: метиловый оранжевый (в точке эквивалентности оранжево-розовое окрашивание);

f_экв = ½.

4. Для количественного определения теофиллина, теобромина и теофиллина в эуфиллине (80-85% в пересчете на сухое вещество) используют метод косвенной нейтрализации. Метод основан на образовании солей серебра и выделения эквивалентного количества азотной кислоты, которую оттитровывают щелочью.

Титрант: титрованный раствор натрия гидроксида (NаОН);

Индикатор: феноловый красный (переход окраски из желтого в фиолетово-красное);

f_экв = 1.

Количественное определение теофиллина в эуфиллине выполняют после нагревания (для удаления этилендиамина) в течение 2,5 часов при 125-130°С.

С целью исключения расхода нитрата серебра разработан способ количественного определения теофиллина, основанный на его взаимодействии с нитратом кадмия. Электронное строение катионов кадмия и серебра сходно. В результате реакции одна молекула нитрата кадмия взаимодействует с двумя молекулами теофиллина, замещая атом водорода в положении 7. Происходит выделение двух молекул азотной кислоты, которую оттитровывают раствором гидроксида натрия (индикатор феноловый красный). Образующийся вблизи точки эквивалентности белый осадок не мешает титрованию.

5. Как слабые кислоты (теобромин, теофиллин, азатиоприн, аллопуринол) титруют методом кислотно-основного титрования в протофильном растворителе.

Растворитель: диметилформамид, диметилсульфоксид или бутиламин.

Титрант: титрованный раствор метилата лития или натрия.

Индикатор: тимоловый синий (от желтого через зеленый до синего).

Азатиоприн титруют в среде ДМФА гидроксидом трибутиламмония.

Точку эквивалентности устанавливают потенциометрически.

Аллопуринол титруют в среде диметилсульфоксида или ДМФА раствором гидроксида натрия в смеси метанола и бензола по тимоловому синему или точку эквивалентности устанавливают потенциометрически, применяя стеклянный электрод в качестве индикаторного, а хлорсеребряный – в качестве электрода сравнения.

Теофиллин в аминофиллине можно титровать в смеси диметилформамида и воды. Титруют водным раствором гидроксида натрия, индикатор тимоловый синий. Содержание воды в точке эквивалентности достигает 20-25% и не оказывает влияния на результаты титрования.

6. Образование серебряных солей для теофиллина, теобромина или меркаптопурина лежит в основе обратной аргентометрии.

К раствору препарата добавляют аммиак и фиксированный избыток титрованного раствора нитрата серебра. Образовавшийся осадок серебряной соли отфильтровывают. В фильтрате определяют избыток нитрата серебра.

Титрант: титрованный раствор роданида аммония (NH₄SCN);

Индикатор: железоаммониевые квасцы (в точке эквивалентности красное окрашивание);

f_экв = ½.

7. Теофиллин в эуфиллине можно определить прямой аргентометрией с использованием в качестве индикатора 2% раствор амидопирина. В точке эквивалентности - синеватое окрашивание.

Освобождающаяся при титровании азотная кислота нейтрализуется этилендиамином и не мешает титрованию.

8.При определении кофеина в смесях (лекарственных формах заводского производства) используют гравиметрию, основанную на извлечении препарата в щелочной среде с помощью хлороформа.

9. Цериметрия основана на окислении производных ксантина сульфатом церия (IV) в кислой среде до образования аллоксанов:

Избыток сульфата церия устанавливают йодометрически после добавления 10%-ного раствора йодида калия и хлороформа.

Титрант: титрованный раствор натрия тиосульфата (Na₂S₂O₃);

Индикатор: крахмал.

10.Для меркаптопурина используют обратное меркуриметрическое титрование. Действуют избытком титрованного раствора нитрата ртути (II). Выпавший осадок фильтруют и избыток титранта оттитровывают раствором роданида аммония (индикатор железоаммониевые квасцы).

11. Спектрофотомерия возможна так как препараты имеют максимумы поглощения в УФ-области спектра.

Дипрофиллин определяют в водном растворе при 273 нм.

В качестве растворителя для азатиоприна используют 0,1М раствор хлористоводородной кислоты, определение проводят при 280 нм. Расчет выполняют по удельному показателю поглощения.

12. Фотоэлектроколориметрия возможна так как препараты образуют окрашенные соединения.

Содержание теофиллина в аминофиллине определяют на основе цветной реакции с нитропруссидом натрия и гексацианоферратом (III) калия. Для определения этилендиамина в качестве реактива используют нингидрин.

Дата добавления: 2017-01-14