Метод выявления клеточной стенки : Метод Пешкова

Вопрос 7. Клеточная стенка бактерий: особенности строения у грамположительных и грамотрицательных бактерий, функции, методы выявления. Особенности строения клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий. L-формы бактерий.

Ответ:

o Клеточная стенка. Располагается над ЦПМ.

▪ КС обеспечивает постоянную форму клетки, механическую и осмотическую защиту, взаимосвязь с окружающей средой, несет рецепторы для бактериофагов.

▪ Отдельные соединения в составе КС обладают целым спектром иммунобиологических свойств: участвуют в адгезии, угнетении фагоцитоза, обладают иммуномодулирующей активностью и т.д.

▪ Химический состав и строение клеточной стенки постоянны и являются важным таксономическим признаком.

o В зависимости от строения клеточной стенки прокариоты, относящиеся к эубактериям, делятся на две большие группы: грамположительные и грамотрицательные бактерии.

▪ Основа - пептидогликан, обеспечивающий ригидность и эластичность КС.

▪ Структура: N-ацетилглюкозамина и N-ацетилмурамовой кислоты, соединенных между собой посредством гликозидных связей.

▪ К каждому остатку N-ацетилмурамовой кислоты присоединен короткий пептид из 4-5 аминокислот.

▪ Две особенности пептидного хвоста заслуживают внимания: наличие аминокислот в D-форме (неприродная конфигурация) и высокое содержание аминокислот с двумя аминогруппами. Это имеет принципиальное значение для пространственной организации пептидогликана. Обе аминогруппы этих аминокислот могут участвовать в образовании пептидных связей.

▪ У грамположительных эубактерий он составляет основную массу вещества клеточной стенки (от 40 до 90%), у грамотрицательных — содержание пептидогликана значительно меньше (1—10%).

▪

▪ Функции клеточной стенки:

▪ -Обусловливает форму клетки.

▪ -Защищает клетку от механических повреждений извне и выдерживает значительное внутреннее давление.

▪ -Обладает свойством полупроницаемости, поэтому через нее избирательно проникают из среды питательные вещества.

▪ -Несет на своей поверхности рецепторы для бактериофагов и различных химических веществ.

o Особенности строения КС Гр+

▪ Клеточная стенка грамположительных бактерий достаточно плотно прилегает к ЦПМ.

▪ Пептидные сшивки в пептидогликане обеспечивают его трехмерную пространственную организацию.

▪ Многослойный пептидогликан пронизывают тейхоевые кислоты – полифосфатные соединения на основе рибитола или глицерина.

▪ Тейхоевые кислоты ковалентно могут соединяться с N-ацетилмурамовой кислотой (собственно тейхоевые или стеночные) или с гликолипидом ЦПМ (липотейхоевые).

▪ Свободные гидроксилы фосфорной кислоты придают тейхоевой кислоте свойства полианиона, определяющего поверхностный заряд клетки.

o Особенности строения КС Гр-

▪ Пептидогликан образует только тонкий внутренний слой клеточной стенки, неплотно прилегающий к ЦПМ.

▪ У большинства видов пептидогликан образует одно- или двухслойную структуру, характеризующуюся весьма редкими поперечными связями между гетерополимерными цепями.

▪ Снаружи от пептидогликана располагается дополнительный слой клеточной стенки — наружная мембрана. Она состоит из фосфолипидов, типичных для элементарных мембран, белков, липопротеина и липополисахарида (ЛПС).

▪ ЛПС сложного молекулярного строения, занимает около 30—40% поверхности наружной мембраны и является ее важнейшим компонентом.

Методом выявления клеточной стенки является метод Пешкова (КС –красная; цитоплазма –розовая), по Грамму-тип стоения клеточной стенки.

Этапы окраски:

1.мазок протравливать в 10% растворе танина 6-8 мин

2.промыть водой

3.окрашивать водным раствором фуксина 30-60 сек

4.высушить

Сущность метода: танин уплотняет клеточную стенку бактерий, и большая часть фуксина задерживается в ней

Цель: выявление клеточной стенки. КС - красная, цитоплазма -розовая

o Особенности клеточной стенки кислотоустойчивых бактерий

o Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий содержит большое количество липидов и восков, делающих их устойчивыми к последующему после окрашивания обесцвечиванию кислотами, щелочами или этанолом (например, виды Mycobacterium или Nocardia). Для их окраски применяют метод Циля-Нильсена.

o L-формы

▪ Если бактерии частично или полностью утратили клеточную стенку, но сохранили способность к размножению, они называются L-формами.

▪ L-формы бактерий образуются под воздействием препаратов, ингибирующих синтез пептидогликана (антибиотик пенициллин) или разрушающих пептидогликан (лизоцим).

▪ Изучают L-формы в фазово-контрастном микроскопе

Дата добавления: 2015-08-31