Количественное определение активности амилазы (по Вольгемуту)

Лабораторная работа №6

Биохимия ФЕРМЕНТов

Указания к оформлению лабораторной работы

Ход работы

Исследуемый материал и реактивы

1. Слюна. 2. Уксусная кислота ледяная. 3. Спиртовой раствор α–нафтола (1%). 4. Серная кислота концентрированная.

В пробирку собирают 1-2 мл слюны и по каплям (10-20 капель) приливают концентрированную уксусную кислоту, помешивая содержимое пробирки стеклянной палочкой. Выпадает осадок муцина. Осторожно сливают жидкость из пробирки, а сгусток слегка высушивают фильтровальной бумагой. К муцину прибавляют 10-20 капель 1% спиртового раствора α–нафтола и по стенке пробирки, наклонив ее, осторожно наслаивают 20 капель концентрированной серной кислоты. При стоянии образуется красно-фиолетовое кольцо.

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, принцип метода, химизм реакции и сделайте выводы о природе простетической группы сложного белка муцина.

Контрольные вопросы

1. Что такое гликопротеины, и какие Вы знаете качественные реакции на углеводный компонент муцина?

2. Назовите известные Вам гликопротеины.

Ферменты – биологические катализаторы белковой природы. Синтезируются в клетках организма. Каталитические свойства ферментов связаны с их способностью специфически активировать химические реакции.

Работа, которую выполняют ферменты в качестве биологических катализаторов, необычайно эффективна. В некоторых случаях реакции под действием ферментов протекают более чем в миллион раз быстрее нежели в их отсутствие.

Высокая каталитическая активность ферментов связана с тем, что они временно соединяются с субстратами, образуя фермент-субстратные комплексы.

Ферменты могут быть как простыми (состоят только из аминокислот), так и сложными, т.е. в своем составе имеют небелковый компонент – кофермент. Коферментами могут быть ионы металлов, нуклеотиды, производные нуклеотидов и др.

Для знакомства со свойствами ферментов используют в качестве объектов α-амилазу слюны. Она катализирует гидролиз крахмала и гликогена и является эндополиглюкозидазой, разрушающей α-1,4-гликозидные связи в молекуле этих полисахаридов. Фермент амилаза осуществляет гидролиз крахмала через промежуточные соединения (декстрины) до мальтозы Источником амилазы может быть слюна, содержащая α-амилазу. Гидролиз крахмала α-амилазой происходит через ряд стадий. Нерасщепленный крахмал с йодом дает синее окрашивание, декстрины в зависимости от размера их молекулы: амилодекстрины – фиолетовое; эритродекстрины – красное; арходекстрины и мальтоза – бесцветное (желтое окрашивание раствора связано с окраской самого раствора йода).

Этим методом определяют активность амилазы в слюне, в сыворотке крови, в моче.

Принцип метода. Метод заключается в том, что слюну разводят в определенной последовательности, после чего приливают одно и тоже количество раствора крахмала, находят наименьшее содержание фермента, которое полностью расщепляет все количество крахмала, затем производят пересчет на 1 мл слюны.

Амилазная активность слюны выражается в количестве 0,1% раствора крахмала, которое гидролизуется 1 мл неразбавленной слюны при t = 38°C в течение 30 мин. В норме амилазная активность слюны .

Дата добавления: 2017-02-01