V Реакция Гипперт-Сальковского.

Качественные реакции на холестерол

Лабораторная работа №20

Указания к оформлению лабораторной работы

Ход работы

Исследуемый материал и реактивы

1. Кровь. 2. Вата. 3. Спирт. 4. Скарификатор.5. Раствор хлорида кальция (0,025М). 6. Раствор гепарина.

В пробирку вносят 2 мл 0,025М раствора хлорида кальция и 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают и определяют экстинкцию (Е₁) на фотоэлектроколориметре против раствора хлорида кальция в кюветах толщиной слоя 5мм при красном светофильтре (630 нм). Затем в кювету добавляют 0,1 мл раствора гепарина, перемешивают и точно через 4 мин снова определяют оптическую плотность раствора (Е₂) в тех же условиях. Разница Е₂- Е₁ приходится на экстинкцию, обусловленную β-липопротеинами.

Вычисляют разность оптической плотности и умножают ее на 10 – эмпирический коэффициент, предложенный Ледвиной, т. к. построение калибровочной кривой сопряжено с рядом трудностей. В норме содержание β-липопротеинов составляет 3–4,5 г/л. Содержание β-липопротеинов колеблется в зависимости от возраста и пола.

В тетради для лабораторных работ запишите ход работы, полученные результаты:

Е₁= Е₂= х(г/л) = (Е₂ – Е₁)*10, x (г/л) =

Сделайте выводы о возможных причинах отклонения полученных результатов от нормальных величин.

Контрольные вопросы

1. Что такое липопротеины? К какому классу соединений они относятся?

2. Назовите функции известных Вам липопротеинов.

3. Назовите причины изменения нормального содержания β-липопротеинов в крови?

Свободный холестерол и его эфиры являются одними из основных липидных компонентов крови. Уровень холестерола в крови колеблется в пределах 3,6-6,4 ммоль/л. Холестерол – важный элемент мембранной структуры, предшественник стероидных гормонов, витамина Д, желчных кислот. Холестерол присутствует в пищевых жирах и может синтезироваться многими тканями. Уровень холестерола даже у здорового человека может колебаться в зависимости от возраста, физической нагрузки, умственного напряжения и времени года.

При нарушении жирового обмена холестерол может накапливаться в крови. Увеличение уровня холестерола в плазме крови (гиперхолестеролемия) наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, механической желтухе, нефрите, нефрозе (особенно при липоидных нефрозах), гипотиреозе. Понижение холестерола в крови (гипохолестеролемия) наблюдается при анемиях, голодании, туберкулезе, гипертиреозе, раковой кахексии, паренхиматозной желтухе, поражении центральной нервной системы, лихорадочных состояниях, при введении инсулина.

Принцип метода. При добавлении к хлороформенному раствору холестерола или растительного масла концентрированной серной кислоты жидкость окрашивается в красный цвет. Реакция обусловлена образованием холестерилена – продукта дегидратации холестерола красного цвета:

Дата добавления: 2017-02-01