Учет опыта

Постановка опыта.

Питательные среды.

Лучше использовать среду Мюллер-Хинтона, т. к. ее готовят из хорошего мяса от экологически чистых животных. Среда АГВ содержит много суррогатов и дает искаженные результаты.

а) Приговленную среду Мюллер-Хинтона внести в чашки Петри.

б) Подготовленную исследуемую культура засеять «широким» газоном.

Методики посева:

1. Стерильной градуированной пипеткой взять 1 мл исследуемой культуры, приподнять крышку чашки Петри, ввести под нее пипетку и смочить поверхность среды культурой. Чтобы поверхность среды полностью смочилась культурой, необходимо взять чашку в руки, равномерно покачивая ее добиться смачивания всей поверхности. Наклонив чашки собираем избыток культуры у бортика, откуда убираем его, отбирая пипеткой в дезраствор.

2. Пастеровской пипеткой взять исследуемую культуру и перенести в центр питательной среды чашки Петри. Взять стерильный бактериальный шпатель и распределить равномерно культуру по поверхности среды.

в) Засеянные чашки подсушивают 30-40 минут при комнатной температуре.

г) На поверхность засеянной среды пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные различными антибиотиками. Каждый диск слегка прижимают браншами пинцета к поверхности среды. Диски накладывают на расстоянии друг от друга и от края чашки 2 см. Одну чашку используют для изучения чувствительности одного штамма к 4-5 антибиотикам. Перед взятием очередного диска бранши пинцета обжигают.

Антибиотик, находящийся в диске, диффундирует в среду, формируя вокруг диска зону угнетения роста чувствительных к нему микроорганизмов. Величина зоны угнетения роста определяет степень чувствительности микробов к антибиотику. Измерение данной зоны проводят с помощью линейки по диаметру.

Степень чувствительности микроорганизмов к антибиотику	Диаметр зоны угнетения
Высокочувствительные	Больше 25 мм
Чувствительные	15-25 мм
Малочувствительные	10-14 мм
Нечувствительные (устойчивые)	10 мм, полное отсутствие зоны задержки роста

В результате анализа указывается, какой чувствительностью обладает исследуемый возбудитель, а не размер зоны задержки роста. Например, стафилококк чувствителен к ампициллину, оксациллину.

Стандартные диски с антибиотиками представляют собой кружки диаметром 5 мм, приготовленные из определенных сортов фильтровальной бумаги, пропитанные антибиотиками такой концентрации, которая обуславливает одинаковый диаметр зон задержки роста чувствительных тест-микробов. Для удобства работы диски с различными антибиотиками окрашивают в контрастные цвета (желтый, зеленый, голубой, сиреневый и д.р.). В последнее время выпускают белые диски с оттиском кода антибиотика черного цвета, диски имеют ограниченный срок действия, так как могут терять активность под действием света, температуры, влажности. Поэтому хранят их в темном прохладном месте во флаконах. На дно флакона помещают поглотитель влаги — силикагель. Если силикагель изменит первоначальный цвет, то пользоваться антибиотиком нельзя.

Занятия №9

Определение чувствительности микроорганизмов к фагам

План занятия

1. Выделение фага из исследуемого материала

2. Качественные методы индикации фага в исследуемом фильтрате

3. Определение активности фага

Цель занятия

Образовательная: изучив материал, студент должен самостоятельно определить активность фага по Аппельману и Грация.

Знать:

1. Биологические свойства фага

2. Применение фага в лабораторной практике

3. Методики выделения фага из исследуемого материала

4. Качественные реакции на фаг по Отто и Уварову

5. Титрование фага по Аппельману

Уметь:

1. Подготовить материал для выделения фага

2. Выделить фаг из жидкого, вязкого, плотного материала.

3. Поставить качественную реакцию на фаг по Отто.

4. Провести титрование фага по Аппельману.

Фагу присущи резко выраженные паразитические свойства, обуславливающие возможность существования и размножения его только в культурах соответствующего вида микроба. На этом основании присутствие фага можно рассматривать как косвенный показатель загрязненности исследуемого материала соответствующей микрофлорой. Фаги можно искать там, где обитают их хозяева-микробы.

В практике микробиологии обнаружения фага проводят в том случае, когда выделение культуры микроба не дает положительных результатов, например, вследствие малого количества этих микробов в исследуемом материале.

Дата добавления: 2013-12-13