Изучение продуктов жизнедеятельности

Отношение к источникам углерода и азота

Чтобы установить доступные источники углерода, готовят основную синтетическую среду, содержащую следующие вещества (г/л дистиллированной воды): (NH₄)₂HPO₄ — 3,0; КН₂РО₄ – 2,0; NaCl – 0,5; MgSO₄ • 7Н₂О - 0,3; СаС1₂ • 6Н₂О -0,1; FеCI₃ • 6H•O — 0,01. Кроме того, в среду входит смесь микроэлементов по Федорову — 1 мл, которая содержит (г/л дистиллированной воды): Н₃ВО₃ - 5; (NН₄)₂МоО₄ - 5; KI - 0,5; NaBr – 0,52; ZnSO₄ • 6Н₂О - 0,2; AI₂(SO₄)₃ - 0,3.

К готовой минеральной среде добавляют 1% источника углерода. Обычно испытываемые пентозы (арабиноза, ксилоза), гексозы (глюкоза, левулеза, галактоза) стерилизуют при 100 °С в кипятильнике Коха; дисахариды (сахароза, мальтоза, лактоза), полисахариды (декстрин, крахмал, клетчатка), соли органических кислот (муравьиной, уксусной, масляной, янтарной, щавелевоуксусной, яблочной, винной, лимонной, пировиноградной, глюконокой, салициловой, бензойной, протокатеховой), спирты (этиловый, глицерин, эритрин, маннит, дульцит), жиры и углеводы стерилизуют в автоклаве 30 мин при 1 атм.

При испытании источников азота в основной минеральной среде фосфат аммония заменяют двухзамещенным фосфатом калия (К₂НРО₄) и к среде добавляют 1% гл ю козы или другого доступного углевода. В качестве источника азота обычно используют альбумин, пептон, а также аспарагин, глицин и другие аминокислоты, мочевину, аммиачные соли, соли азотистой и азотной кислот в количестве 0,1—0,2% объема питательной жидкости. Для выявления способности микроорганизмов усваивать молекулярный азот из питательной среды исключают все связанные формы азота.

При использовании микроорганизмами источников углерода, в частности углеводов, продуктами их жизнедеятельности нередко бывают газы, кислоты и спирты.

Для обнаружения газов применяют посев уколом в агаровую среду в пробирки. При появлении газов столбик агара разрывается. Используют также жидкую среду с поплавками. Поплавок представляет собой небольшую узкую пробирку (3—4 × 0,5 см). Его опускают вверх дном в обычную пробирку с жидкой средой, которая при стерилизации заполняет поплавок. При развитии микроорганизмов, образующих газы, последние вытесняют жидкость из поплавка.

Образование кислот при посеве на средах, содержащих углеводы, устанавливают при помощи индикатора бромтимолблау, а их количество — титрованием 0,1 н. раствором щелочи. При наличии мела кислоты связываются в кальциевые соли, которые можно обнаружить добавлением к 5 мл среды 1 мл концентрированного раствора оксалата аммония. В присутствии кислот (например, уксусной) выпадает белый осадок, нерастворимый в воде.

Образование спирта определяют при отгонке части субстрата с последующей пробой на спирт (реакция на появление йодоформа).

Продуктами жизнедеятельности микроорганизмов на доступных источниках азота часто бывают: аммиак (проба с реактивом Несслера), сероводород и меркаптан (проба с фильтровальной бумагой, смоченной ацетатом свинца), индол (проба с азотистой кислотой), нитрит (проба с цинк-иод-крахмалом в кислой среде). Редуктазную способность культур выявляют обесцвечиванием метиленового синего.

Дата добавления: 2014-01-04