Выделение чистой культуры ацидофильной палочки

Материалы и оборудование

Разные по качеству пробымолока, высокие пробирки, цилиндры, раствор метиленового синего (5 мл насыщенного раствора метилено­вого синего на 195 мл дистиллированной воды), редуктазник с водой, нагретой до 38—40°С, пробирки со стерильной водопроводной водой по 9 мл в каждой, стерильные пипетки Мора на 1 мл, пробирки со средой Булира с поплавками, расплавленный МПА, агаризованная среда для анаэробных микроорганизмов, водяная баня, термометр, среда Булира в пробирках с поплавками, среда с лактатом.

Таблица 7 - Определение вероятного числа спор лактатсбраживающих анаэробных бактерий в молоке

Количество пробирок с положительными результатами при разных объемах посевного материала	Наи­более веро­ятное число	Количество пробирок с положительными ре­зультатами при разных объемах посевного ма­териала	Наи­более веро­ятное число
1 мл	0.1 мл	0,01 мл	спор в 1 мл	1 мл	0.1 мл	0,01 мл	спор в 1 мл
			0.0				—
			0.5				2,0
			—				3,0
			0.5				—
			0,9				2,5
			—				5,0
			0.9				—
			—				6,0
			—				1,3
			0.6				20,0
			1.2				25,0
			—				70.0
			1.3				110,0 и бо­лее
			0.2

15.2. Методы выделения чистых культур молочнокислых бактерий

Ацидофильная палочка — гомоферментативная молочнокислая бактерия, обитающая в кишечнике человека и животных. Оп­тимальная температура для её развития — 37—40°С, предельная кислотность — 220ºТ (2,0%). Палочка устойчива к фенолу, образует антибиотические вещества. Кисломолочный продукт, приготовленный с использованием в качестве закваски ацидо­фильной палочки, применяют для лечения и профилактики желудочно-кишечных заболеваний, особенно у молодняка крупного рогатого скота.

Для выделения ацидофильной палочки используют кал теленка. Из него готовят препарат, сушат его на воздухе, фик­сируют на пламени и красят метиленовым синим 2—3 мин. Подсчитывают число клеток ацидофильной палочки в десяти полях зрения и находят среднее арифметическое.

В мазке обычно преобладают гнилостные кокковые фор­мы, палочки, встречаются единичные клетки Lactobacillus acidophilus — тонкие палочки, варьирующие по размеру, иногда содержащие гранулы волютина (красятся метиленовым синим в красный цвет — явление метахромазии). Делают посев кала в стерильное молоко и инкубируют при 37—40°С — темпера­туре, оптимальной для развития L. acidophilus.

Из образовавшегося сгустка делают пересев в стерильное молоко и снова инкубируют при 37—40ºС. Таких посевов можно сделать 3—4. Постепенно ацидофильная палочка, обра­зуя молочную кислоту и имея оптимальные для развития усло­вия, подавляет рост гнилостных бактерий, содержащихся в ка­ле. Такую накопительную культуру ацидофильной палочки вы­севают на плотную питательную среду и из отдельной развившейся колонии выделяют чистую культуру.

Плотной питательной средой может служить агар с гидролизованным обратом, который готовит следующим образом. В бутыль с 1 л прокипяченного и охлажденною до 45°С обра­та добавляют разведенный в небольшом количестве теплой во­ды 1 г сухого порошка панкреатина и 5 мл хлороформа. Бутыль встряхивают, плотно закрывают корковой пробкой и выдерживают в термостате 3 сут при 40ºC. Ежедневно содер­жимое бутыли встряхивают, после чего открывают пробку для удаления паров хлороформа. Готовый раствор фильтруют и разбавляют в 4—5 раз водопроводной водой, доводят до рН 7— 7,2 и стерилизуют при 0,5 атм. 30 мин.

L. acidophilus образует мелкие колонии в глубине среды. Их просматривают под микроскопом с объективом 8х. Коло­нии имеют вид рыхлых тонковолокнистых скоплений непра­вильной формы, напоминающих кусочки ваты или мха. Иногда их называют паучками. Из характерных колоний, располо­женных изолированно от других, готовят фиксированный препарат и петлей делают посев в стерильный обрат.

Ацидофильная палочка образует в стерильном обрате од­нородный плотный сгусток. Газообразования в культурах не отмечается. Пересевы повторяют, выдерживая пробирки в тер­мостате при 37—40ºС. Отбирают те из них, которые сбражива­ют молоко не позже чем через 12—14 ч. В лаборатории чистые культуры необходимо пересевать каждые 7—10 дней и хранить при 10ºС.

С целью проверки свойств чистых культур L. acidophilus выделенные культуры используют в качестве закваски для при­готовления ацидофильного молока. Для этого свежее молоко разливают по 100 мл в стерильные стаканы, пастеризуют на водяной бане при 75°С в течение 10 мин. Затем молоко ох­лаждают до 40°С и вносят закваску в количестве 5% (на 100 мл молока — 0,5—1 пробирка чистой культуры). Стаканы закрывают этикеткой с надписью, завязывают и ставят в тер­мостат при 37ºС.

После сквашивания молока проводят его органолептическую оценку и определяют кислотность титрованием. Ацидо­фильная палочка образует в молоке однородный плотный тя­нущийся сгусток казеиновой кислоты. Вкус — чистый, кисло­молочный с характерным металлическим привкусом.

Дата добавления: 2014-01-04