Основные компоненты питательных сред

Для построения органических компонентов микробной клетки необходимы азот, углерод, водород и кислород. Снабжение водородом и кислородом осуществляется за счет воды. В качестве источника углерода гетеротрофные микроорганизмы используют органические соединения (сахара, многоатомные спирты, органические кислоты). Источником азота могут служить неорганические соединения (соли аммония), а также олигопептиды и аминокислоты – продукты гидролиза белков различного происхождения (животного – мяса, рыба, казеин; растительного – соевые бобы, горох; микробного – дрожжи и др.).

Питательные среды должны также содержать и неорганические вещества: соединения хлора, фосфора, серы, натрия, калия, кальция, магния и др.). Минеральные соли необходимы также для создания оптимальных для роста и размножения физико-химических условий (рН, ионная сила и т.д.).

Микробам для нормального развития необходимы микроэлементы, преимущественно металлы (железо, медь, марганец и др.), которые входят в состав простетических групп молекул различных ферментов.

Кроме основных компонентов питательной среды, для жизнедеятельности ауксотрофных микроорганизмов, к числу которых относятся многие патогенные бактерии, требуется присутствие факторов роста – органических соединений, входящих в состав микробной клетки, но не синтезируемых ею самостоятельно. В качестве факторов роста могут выступать различные аминокислоты, азотистые основания, витамины и др. Большинство бактерий нуждается в таких факторах роста, как витамины группы В и никотиновая кислота. Для роста некоторых патогенных бактерий в питательные среды надо добавлять нативные белки (кровь, сыворотку).

Для жизнедеятельности микробной клетки, безусловно, необходима вода как основной растворитель и среда для протекания всех биохимических реакций.

Классификация питательных сред

1. По происхождению:

а) синтетические – состоят из растворов химически чистых соединений в точно установленных дозировках;

б) полусинтетические – включают химически чистые соединения и переработанные нативные компоненты неопределенного состава (гидролизаты мяса, дрожжевой экстракт и др.)

в) натуральные – неизмененные нативные (природные) компоненты (сыворотка крови, яичный белок, молоко и др.)

2. По консистенции:

а) жидкие – мясо-пептонный бульон (МПБ)

б) плотные – содержат 1,5-2,5 % агар-агара

в) полужидкие – 0,3-0,7 % агар-агара

Для придания плотной консистенции к жидкой среде добавляют агар-агар, представляющий собой продукт переработки морских водорослей. Агар-агар плавится при температуре 80-86ºС, затвердевает при температуре около 40ºС и в застывшем состоянии придает среде плотность.

В некоторых случаях для получения плотных питательных сред используют нативные компоненты (свернувшаяся сыворотка крови, свернувшийся яичный белок), которые сами по себе являются плотными.

3. По целевому назначению:

а) основные

б) элективные

в) дифференциально-диагностические

К основным относятся среды, применяемые для выращивания многих бактерий. Они содержат триптические гидролизаты мясных, рыбных продуктов, крови животных или казеина, из которых готовят жидкую среду – питательный бульон и плотную – питательлный агар. Такие среды также служат основой для приготовления сложных питательных сред.

Примеры: МПА, МПБ

Элективные питательные среды предназначены для избирательного выделения и накопления микроорганизмов определенного вида (или определенной группы) из материалов, содержащих разнообразную постоянную микрофлору. При создании элективных питательных сред исходят из биологических свойств, которые отличают данные микробы от большинства других.

Примеры: избирательный рост стафилококков на средах, содержащих высокие концентрации хлорида натрия, холерного вибриона – на щелочных средах.

Дифференциально-диагностические питательные среды применяют для различения (дифференциации) отдельных видов (или групп) микробов. Принцип составления этих питательных сред основан на различиях в биохимической активности бактерий разных видов вследствие неодинакового набора ферментов.

В состав дифференциально-диагностической среды входят следующие компоненты: а) основная питательная среда, обеспечивающая размножение бактерий, б) определенный углевод, способность использовать который является диагностическим признаком для данного вида, в) цветной индикатор, изменение цвета которого свидетельствует об изменении рН в кислую сторону вследствие ферментации соответствующего углевода.

Примеры: среды Гисса, Эндо, Плоскирева, Левина.

Схема проведения бактериологического метода

Принцип метода: Выделение чистой культуры возбудителя и ее идентификация.

Этапы метода: 1-й день. Взятие и посев исследуемого материала на плотные питательные среды с целью получения изолированных колоний. (Посев крови делается на жидкие питательные среды в соотношении 1:10.)

2-й день. Изучение и описание культуральных признаков (характера роста бактерий) и другие необходимые мероприятия (например, реакция агглютинации на стекле с поливалентными сыворотками) для определения колонии возбудителя и пересев этой колонии на среду накопления (скошенный агар среды Ресселя, Мюллера и др.).

3-й день. Проводится идентификация по морфологическим, культуральным, тинкториальным (окраска по Граму), по антигенному строению, факторам патогенности, фаготипированию. Ставится опыт по определению биохимических свойств и чувствительности микробов к антибиотикам.

4-й день. Учёт биохимических свойств чувствительности к антибиотикам. Даётся заключение о виде выделенного возбудителя.

Большинство патогенных бактерий являются быстрорастущими: видимый рост на питательных средах наблюдается через 18-24 часа.

Продолжительность метода для бактериальных инфекций приблизительно 72 часа. Имеются отклонения в зависимости от скорости роста микроба: холерный вибрион растёт быстро - 36-48 часов, туберкулёзная палочка медленно – 2-6 недель.

Для вирусов метод называется вирусологическим, для риккетсий – риккетсиологическим и т.д

Дата добавления: 2014-01-06