Контроль подтверждения беременности

Деление зиготы

После завершения периода инсеменации яйцеклетку переносят в равновесную каплю среды по парафиновое масло. Среда состоит из свежеприготовленного раствора Ham F10 с добавлением 15 % сыворотки крови больной. Растущий эмбрион человека культивируется при температуре 37 °C в атмосфере, содержащей 5 % СО2, 5 % О2 и 90 % N2 в среде с рН, равным 7,3.

О нормальном развитии эмбриона в культуре свидетельствует появление делящихся клеток приблизительно одинакового размера и формы, которые равномерно заполняют большую часть пространства в пределах блестящей оболочки. Деление клеток должно быть нарастающим и наблюдаться во время четко определенного времени. Так, эмбрион должен содержать 2 клетки через 35–46 ч, 4 клетки через 51–63 ч, 8 клеток через 68–86 ч после инсемена‑ции, а стадия 16 клеток должна быть достигнута в пределах 84– 112 ч после оплодотворения.

Если клетки развивающегося эмбриона имеют неправильную форму или отходят от блестящей оболочки, или же скорость деления клеток существенно отличается от описанной выше, то развитие эмбриона считается патологическим и он непригоден для переноса в полость матки.

Оставшиеся эмбрионы хорошего качества могут быть сохранены при очень низкой температуре для дальнейших попыток (криоконсервация эмбрионов).

Так как в большинстве случаев эмбрион переносится в полость матки на стадии 8 или 16 клеток, то это означает, что эмбрион человека перед имплантацией должен содержаться в культуре в течение 3–4 суток.

Эмбрион в 0,05 мл культуральной среды осторожно засасывается в стерильный катетер диаметром 1,4 мм. Затем катетер проводится через цервикальный канал в полость матки, где в области дна эмбрион высвобождается из катетера. С целью облегчения проведения этой процедуры катетер следует разместить по длине для контроля положения его конца в полости матки. Помимо этого, следует очень аккуратно манипулировать шейкой матки во избежание сокращения мышц матки. Если в полость матки переносят более двух эмбрионов, существенно повышается риск многоплодной беременности. После переноса эмбрионов в полость матки назначают препараты прогестерона и эстрогены, чтобы поддержать имплантацию эмбриона. В этом случае говорят о поддержке лютеино‑вой фазы.

Для контроля ранних сроков развивающейся беременности проводят динамическое определение – субъединицы хориониче‑ского гонадотропина, которое помогает определить беременность с 7‑9‑го дня после ТЭ. При наступлении беременности за женщинами ведется постоянное наблюдение методами, принятыми для ведения беременности и родов женщин с отягощенным акушерским анамнезом.

Должно производиться серийное ультразвуковое обследование плода. На 1‑7‑й неделе беременности определяются положение амниона и сердечная деятельность плода. После этого контроль должен производиться на 20, 28 неделе и далее с целью определения степени развития плода. На основании полученной информации можно наблюдать характеристики роста плода на протяжении беременности и выявить определенную патологию развития скелета. Пункцию амниона можно производить приблизительно на 16‑й неделе беременности. Таким образом может быть определен кариотип и уровень фетопротеинов, определяющий наличие дефектов развития нервной трубки плода.

ИКСИ (инъекция сперматозоида в яйцеклетку) – это особая форма ЭКО, применяемая при тяжелых формах мужского бесплодия. При низком содержании подвижных сперматозоидов в эякуляте – тяжелой олигозооспермии и/или астенозооспермии, и/или тератозооспермии вероятность оплодотворения очень мала. Поэтому основной задачей ИКСИ является осуществление проникновения сперматозоида через оболочку яйцеклетки – оплодотворение. Для успешного проведения ИКСИ достаточно наличия в эякуляте единичных живых сперматозоидов.

Показанием к ИКСИ является также тяжелое аутоиммунное бесплодие у мужчин при титре антиспермальных антител в сперме более 50 %. В этом случае, как правило, количество подвижных сперматозоидов существенно снижено.

ИКСИ применяется также при недостаточном оплодотворении в предыдущих попытках (оплодотворено менее 50 %), при малом количестве яйцеклеток.

Под инвертированным микроскопом сперматозоид втягивают в очень тонкую стеклянную иглу и инъецируют непосредственно в яйцеклетку.

Такая микроинъекция имитирует естественный процесс проникновения сперматозоида в яйцеклетку. Эта процедура не оказывает отрицательного влияния на слияние пронуклеусов яйцеклетки и сперматозоида. Если оплодотворение и деление произошло, как и при процедуре ЭКО, спустя 2–5 дней эмбрион переносят в полость матки.

Как только оплодотворение произошло, качество эмбрионов и вероятность наступления беременности после ИКСИ не отличаются от таковых после традиционного ЭКО.

Для осуществления ЭКО необходима рабочая станция, в состав которой входят: ламинарные шкафы, термостаты и подогреваемые поверхности, антивибрационный стол, криоконсерватор, СО2 инкубаторы, стереомикроскопы.

Ламинарные шкафы и рабочие станции предназначены специально для работы с ооцитами, эмбрионами и спермой в лабораториях ЭКО. Они обеспечивают циркуляцию ламинарного потока воздуха для предотвращения контаминации, класс I биологической защиты (защита материала), имеют встроенную увлажнительную систему и большой выбор опций для формирования рабочей станции ЭКО нужной конфигурации.

Антивибрационные столы обеспечивают оптимальные условия для проведения процедур ЭКО и ИКСИ.

Термостаты и подогреваемый столы необходимы для культивирования и транспортировки половых клеток и эмбрионов в пределах лаборатории в условиях постоянной температуры, как правило, это около 37 °C.

Криоконсерватор необходим для криоконсервации спермы, яйцеклеток и эмбрионов. Имеет модульную структуру и состоит из контроллера температуры, криокамеры и криованны. Такие устройства поддерживают диапазон температур от ‑120 до +40 °C, имеют несколько предустановленных программ, предупреждающий сигнал при изменении температуры более чем на 1,5 °C, минимальный температурный шаг 0,04 °C, соединение с компьютером.

СО2‑инкубаторы могут быть настольными и портативными разнообразных размеров. Инкубаторы имеют несколько изолированных камер для биоматериала, диапазон поддерживаемой температуры зависит от конструкции прибора, производителя и поставленных целей. Портативные СО2 инкубаторы имеют встроенную батарею, обеспечивающую бесперебойную работу аппарата при транспортировке образцов, систему тревог по температуре и заряду батареи.

Также для нормальной работы ЭКО‑лаборатории необходимы расходные материалы: среды для культивирования, для промывки спермы, пробирки, чашки Петри, 4‑луночные планшеты, пипетки, криопробирки, криосоломки, микропипетки для ИКСИ, наконечники для стриппера для очистки ооцитов, наборы для пункций, катетеры для переноса, фильтры для шприцов, стерильное минеральное масло.

Глава 5

Дата добавления: 2014-11-25