Трепонемные реакции 6 страница

Вирусы, переносимые кровью, могут находиться в свободном состоянии или в сопровождении клеточных элементов. Свободно в плазме перемещаются вирус гепатита В, пикорнавирусы и тогавирусы. Вирус колорадской клещевой лихорадки и вирус Рифт-Валли соединяются с эритроцитами. Вирус Эпстайна— Барра (ВЭБ), ЦМВ, вирус краснухи и ВТЛЧ или III/LAV перемещаются в комплексе с лимфоцитами.

В некоторых случаях вирусы распространяются различными путями на раз­ных стадиях своего инфекционного цикла. Вирус ветряной оспы рассеивается по коже гематогенным путем, вызывая появление ветряночных элементов. Затем вирус движется афферентно вдоль нервных волокон от кожи до нейронов ган­глия заднего корешка, где и сохраняется в латентной форме. Реактивация вируса сопровождается его эфферентным движением по чувствительным нервным волок­нам до соответствующих кожных дерматом с образованием опоясывающего пора­жения. Распространение вируса по нервным путям связывают прежде всего с повторными эпизодами оральной и генитальной инфекции, вызванной вирусом простого герпеса. Полиовирус представляет собой пример вируса, способного распространяться как гематогенным, так и нейрогенным путями. Гематогенный путь рассматривается обычно как основной путь попадания вируса в центральную нервную систему, хотя не исключен и путь по вегетативным нервам кишеч­ника. Определенную роль в перемещении полиовируса по центральной нервной системе может играть аксональный транспорт.

После того как вирус попал из места своей первичной репликации в орган-мишень, он должен инфицировать популяцию чувствительных клеток. Для этого необходимо, чтобы специфические вирусные структуры (вирусные бел­ки присоединения) и вирусные рецепторы на клетках пришли во взаимо­действие. Точная природа некоторых из этих вирусных рецепторов постепенно становится известной. Вирусзакодированные ткани — специфические усилители могут в определенной степени опосредовать вирусное повреждение специфической клеточной популяции. Для развития литической инфекции необходимо, чтобы все последовательные этапы вирусного репликационного цикла были успешно осу­ществлены.

Защитные факторы организма. Образование антител. Большин­ство вирусов является хорошими антителами, способными стимулировать иммун­ный ответ, поскольку они содержат большое количество инородных для орга­низма хозяина белков, каждый из которых имеет множество антигенных участков. Кроме того, несмотря на то что количество вирусного антигенного материала первоначально может быть довольно незначительно, по мере репликации вируса оно постоянно увеличивается. Лишь незначительная часть антител играет суще­ственную роль в защите организма хозяина от инфекции, а в некоторых случаях сами антитела могут участвовать в патогенезе заболевания.

Иммуногенность вирусов зависит от их природы и от различных факторов организма. Медленные вирусы, вызывающие куру и болезнь Крейтцфельда— Якоба, видимо, не провоцируют в организме хозяина какого-либо заметного иммунного ответа. Путь введения вируса также может играть роль в развитии иммунного ответа. При экспериментальном развитии гриппозной инфекции было показано, что внутривенная инокуляция вируса обладает большей иммуногенностью, чем внутрибрюшинная, которая в свою очередь превышает выражен­ность иммунного ответа при подкожном введении вируса.

Антитела, защищающие организм хозяина, подавляя инфекционную актив­ность вируса, относятся к нейтрализующим антителам (HAT). Связывание HAT с вирусом представляет собой обычно обратную реакцию. Инфекционная ак­тивность вируса может снижаться за счет того, что HAT подавляет связы­вание, проникающую способность или процесс раздевания вируса; способствует агрегации вирионов; ускоряет деградацию вирусов в пузырьках или облегчает опсонизацию вирусов и их последующий фагоцитоз. Связывание полиовирусов с HAT, возможно, приводит к конформационным перестройкам наружного капсида, что препятствует раздеванию вирусов, но не процессу их соединения с субстратом.

Комплемент. Если антитела не образуются, вирусы могут стимулиро­вать активацию как альтернативного, так и классического путей активации комп­лемента. Активированные компоненты комплемента (например, С3b) могут высту­пать в качестве опсонинов, облегчающих фагоцитоз вирусов. Активация аль­тернативных механизмов комплемента в сочетании с образованием антител мо­жет приводить к лизису вирусов, имеющих оболочку, или клеток, инфицирован­ных вирусами. Несмотря на то что система комплемента играет определенную роль в защите организма животных от вирусной инфекции, состояния, сопро­вождающиеся недостаточностью комплемента, в типичных случаях не осложня­ются более частыми приступами или более тяжелым течением вирусной ин­фекции.

Клеточный иммунитет. Клетки, инфицированные вирусами, могут быть разрушены лимфоцитами или другими клетками, использующими как антителозависимые, так и антителонезависимые механизмы. Клетки-киллеры пред­ставляют собой большие содержащие гранулы лимфоциты, которые связываются с клетками-мишенями, а затем секретируют цитотоксические молекулы, нахо­дящиеся в азурофильных гранулярных пузырьках. Активность клеток-киллеров повышается под воздействием интерферонов и некоторых вирусных гликопротеидов и не зависит от активности антител. Цитотоксичность клеток-киллеров представляет собой один из наиболее ранних защитных механизмов макроор­ганизма против вирусной инфекции (максимальная ее активность отмечается через 2—3 дня), включение которого предшествует образованию антител (появ­ляющихся на 7-й день заболевания), активации Т-лимфоцитов и формированию реакции гиперчувствительности замедленного типа. Активные клетки-киллеры были обнаружены у людей, инфицированных вирусами цитомегалии, Эпстай­на — Барра, кори и эпидемического паротита.

Разрушение клеток, инфицированных вирусами, зависящее от образования антител, может осуществляться вследствие антителозависимой клеточной цитотоксичности (АЗКЦ) либо вследствие воздействия антителонезависимых Т-лимфо­цитов, обладающих цитотоксической активностью. При реакциях, опосредованных через АЗКЦ, вирусспецифические антитела, связанные с антигенами инфици­рованной клетки, взаимодействуют с рецепторами для антител IgG, находя­щимися на поверхности специализированных лимфоцитоподобных клеток (кле­ток-киллеров). Связывание антител IgG с клеточными рецепторами активирует клетку-киллер и приводит к тому, что она уничтожает клетку-мишень. Макро­фаги, лимфоциты и ПМН также имеют Fc-рецепторы и могут принимать участие в реакциях АЗКЦ.

Лизис инфицированных клеток, опосредованный Т-лимфоцитами, обладаю­щими цитотоксической активностью, относится к 1-му классу тканевой совмести­мости, ограниченной антигенами. Цитотоксическая активность Т-лимфоцитов должна быть индуцирована антигеном, доставляемым макрофагами или другими антигендоставляющими -клетками (АДК). Активация цитотоксичности Т-лимфо­цитов вирусспецифична и может быть специфична даже для отдельных штам­мов некоторых вирусов. Цитотоксичные Т-лимфоциты, выделенные у мышей, инфицированных лимфоцитарным хориоменингитом (ЛХМ), убивают только клетки-мишени, инфицированные ЛХМ, у мышей, относящихся ко 2-му классу тканевой совместимости. Выраженность реакции цитотоксичных Т-лимфоцитов контролируется генами, ответственными за иммунный ответ (ИО) у мышей. Ана­логичная регуляция может иметь место и у человека.

Интерфероны. Лейкоциты продуцируют более дюжины интерферонов (альфа-интерфероны, лейкоцитарные), последовательность аминокислот у которых на 70% гомологична.

b-Интерферон (фибробластный) продуцируется фибробластами и эпители­альными клетками. Его структура на 30% гомологична альфа-интерферонам. Как a-, так и b-интерфероны сохраняют стабильность в кислой среде (рН2,0) и отно­сительно устойчивы к высокой температуре. g-Интерферон (иммунный) продуци­руется как сенсибилизированными, так и несенсибилизированными Т-лимфоци­тами. Он обладает отличными от других интерферонов физико-химическими свой­ствами и имеет специфические индукторы. Кроме того, его действие опосредуется через клеточные рецепторы, отличные от тех, которые используют интерфероны альфа и бета. Гены, кодирующие интерфероны, располагаются на следующих хромосомах у человека: на 9-й (a и b), на 2-й (b), на 5-й (b) и на 12;й (g).

Продукция интерферонов может быть индуцирована как активными, так и инактивированными вирусами, двуспиральной РНК и целым рядом других соединений. Количество индуцируемого интерферона может варьировать в за­висимости от воздействующего вируса. Все интерфероны обладают чрезвычайно высокой специфической активностью и, как правило, наиболее активны в клетках тех видов животных, где они были продуцированы (видоспецифичны). Это объяс­няется различием природы интерфероновых рецепторов. Продукция интерферона, видимо, зависит от угнетения клеточных генов, вызванного присутствием вирус­ной нуклеиновой кислоты в цитоплазме клеток макроорганизма. В результате быстро формируются иРНК для интерферона и начинается его синтез.

Вновь продуцированный интерферон высвобождается во внеклеточную жид­кость и затем связывается со специфическими рецепторами близлежащих кле­ток. Ген, кодирующий синтез гликопротеидного рецептора для альфа- и бета-интерферонов, локализуется у человека, по всей видимости, на 21-й хромосоме. Свя­зывание интерферона с этим рецептором вызывает цепь сложных реакций. Син­тезируется протеинкиназа, фосфорилирующая фактор, инициирующий синтез белка. Это приводит к подавлению образования первичного комплекса, а сле­довательно, и синтеза вирусных белков. Индуцированная 2,5-олигоизоаденилатсинтетаза приводит к образованию 2,5-олигоаденилатов, которые в свою очередь активируют клеточную эндонуклеазу, вызывающую распад вирусной иРНК. По­давляются метилтрансферазные реакции, что приводит к снижению метилирования иРНК, нарушая, таким образом, синтез вирусных белков. Кроме того, изменяются антигены поверхности клеток-мишеней, в результате чего облегча­ется проявление действия антигенов тканевой совместимости 1-го и 2-го клас­сов. Интерфероны повышают также активность клеток-киллеров, Т-лимфоцитов, обладающих цитотоксичностью, и клеток, участвующих в реакциях АЗКЦ. Доля участия каждой из этих реакций в создании интерферонвызванного антиви­русного состояния до настоящего времени не установлена.

Иммунопатология, индуцированная вирусом. Вирусы могут соединяться с вирусспецифическими антителами, образуя циркулирующие иммунные комплексы, способные самостоятельно участвовать в иммунопатогенезе. Вирусная стимуляция В-лимфоцитов может привести к появлению поликлональных антител к антигенам, не связанным с первичным вирусным агентом. Вирусы могут также индуцировать образование перекрестных антител, взаимо­действующих с нормальными структурами макроорганизма, в составе которых имеются участки, сходные по строению с вирусными антигенами (молекуляр­ная мимикрия). Аутоантитела этих типов также могут привести к образо­ванию. иммунных комплексов. Иммунные комплексы оседают на базальных мем­бранах клеток различных тканей, включая кожу, почки, сосудистые сплетения и стенки кровеносных сосудов. Попадая в ткани, эти иммунные комплексы привлекают и активируют разнообразные медиаторы воспаления, что приводит к повреждению тканей.

Аутоантитела, образованные под влиянием вирусной инфекции, могут непо­средственно повреждать ткани. Аутоантитела к лимфоцитам, тромбоцитам, гладкомышечным клеткам, промежуточным филаментам, иммуноглобулинам и миелиновым основным белкам обычно нестойки, и титр их невысок. Они образуются в результате целого ряда механизмов, включая: 1) внедрение антигенов макро­организма в вирусные структуры или изменение антигенов макроорганизма под влиянием вируса; 2) изменение иммунорегуляторных систем под влиянием вируса; 3) перекрестную реактивность между вирусными антигенами и нормаль­ными структурами клеток макроорганизма (молекулярная мимикрия); 4) воз­никновение антиидиотипических антител, стимулирующих клеточные рецепторы макроорганизма.

Эпидемиология. Эпидемиология вирусов включает изучение причин, распре­деления, частоты, путей передачи и распространения вирусных болезней. Важным аспектом эпидемиологии вирусов является аккуратная регистрация частоты воз­никновения и преобладания вирусных инфекций. Частота может быть опреде­лена как число новых случаев той или иной болезни, возникших в течение определенного периода времени, а преобладание — как общее число случаев заболевания. Целесообразно определять удельную частоту и удельное преоб­ладание заболевания, величины которых получают путем деления соответствую­щих значений на размеры популяции, имеющей риск данного заболевания. Термины «эпидемия» и «вспышка» являются формальными и лишь указывают на то, что большее, чем ожидалось, число случаев того или иного заболевания возникло в узкой популяции, географической зоне или за какой-то период вре­мени.

Появление острого вирусного заболевания указывает на то, что инфици­рованный организм вступил в контакт с восприимчивым индивидуумом при условиях, благоприятных для передачи конкретного вирусного агента. Интервал времени между первичным контактом с вирусом и последующим развитием признаков заболевания называется инкубационным периодом. Его длительность может варьировать от нескольких дней (при гриппе) до нескольких лет (при медленных инфекциях). Инфицирование вирусом не всегда приводит к появлению клинических признаков заболевания. Процент инфицированных людей, у которых развиваются яркие симптомы заболевания, варьирует от 100% при бешенстве и кори до 0% при паповавирусах ВК и JC. В большинстве случаев симптомы заболевания менее выражены и реже встречаются у детей, чем у взрослых (например, ВЭБ, мононуклеоз, паралитический полиомиелит, гепатит А).

Передача вируса от инфицированного организма восприимчивому индиви­дууму осуществляется в нескольких формах. Передача от человека к человеку может происходить: 1) при наличии у одного из них острого заболевания; 2) если один из них является хроническим носителем вируса или 3) от матери плоду. Заражение может произойти воздушно-капельным путем (с дыхательными аэрозолями), фекально-оральным путем, при половых контактах или вследствие непосредственной инокуляции вируса при использовании для инъекций инфици­рованных игл или препаратов крови для переливания.

Дыхательные аэрозоли образуются обычно при кашле или чиханье. Во время чиханья может образовываться до 2 млн аэрозольных частиц, а во время кашля — до 90 тыс. Судьба этих частиц зависит как от окружающих условий (влажность, потоки воздуха), так и от их размеров. Небольшие час­тицы дольше, чем крупные, остаются в воздухе и могут избегать фильтрую­щего эффекта носового дыхания, при котором частицы диаметром более 6 мкм задерживаются. Число образующихся аэрозольных частиц может варьировать у разных штаммов одного и того же вируса.

Для большинства вирусов остается неясным, какое число вирусных частиц необходимо для развития выраженной респираторной инфекции. Для вируса гриппа А, аденовируса или вируса Коксаки А21 достаточно всего 10 частиц. Образование аэрозолей — не единственный возможный путь передачи дыха­тельной инфекции. Для ВЭБ типичным является распространение через слюну во время поцелуя. Важным путем распространения риновирусов, являющихся основной причиной простуды, может стать контакт рук со слизистой оболочкой глаз, носовой или ротовой полости. Этот цикл может быть легко прерван, если следить за гигиеной рук.

Инфицирование через желудочно-кишечный тракт происходит, если вирус, находящийся в испражнениях, загрязняет пищу или воду, а затем поглощается восприимчивым индивидуумом (фекально-оральный путь). Руки, испачканные испражнениями, также могут служить еще одним источником распространения энтеровирусов. Высокая частота энтеровирусной инфекции у детей, находящихся в однодневных стационарах и в учреждениях для лиц с пониженным интел­лектом, свидетельствует о трудности поддержания достаточного уровня гигиены в этих условиях.

При многих вирусных инфекциях переносчиком служат насекомые или инфи­цированные животные. При лихорадке денге существует постоянный цикл цир­куляции вируса между людьми и инфицированными москитами. Вирус денге размножается в кишечнике москитов вида Aedes aegypti, накапливается в их слюнных железах и впрыскивается в организм человека во время укуса и заса­сывания крови. У инфицированного человека развивается вирусемия большой концентрации, достаточной для того, чтобы вирус попал от него к неинфици­рованному москиту во время следующего укуса. При других арбовирусных ин­фекциях человек выступает в роли конечного пункта, поскольку степень вирусемии у больного недостаточна для передачи инфекции новой группе насекомых-переносчиков. Цикл этого типа присущ тогавирусам, вызывающим восточный, западный энцефалиты и энцефалит Сент-Луис. Как правило, животными резер­вуарами для арбовирусов служат небольшие птицы и млекопитающие. Лошадь и человек являются конечным пунктом распространения вирусов. В то же время лошади могут быть резервуаром вируса, вызывающего венесуэльский лошадиный энцефалит.

Для некоторых инфекций, переносимых членистоногими, необязательно учас­тие позвоночного промежуточного хозяина, в организме которого развивается вирусемия. От инфицированного клеща или москита вирус может передаваться потомству трансовариальным путем при половом контакте самца и самки мос­кита. Трансовариальная передача позволяет вирусам, переносимым насекомыми, пережить зимние месяцы.

Зоонозные инфекции иллюстрируют другой механизм передачи заболевания. В случае бешенства передача вируса происходит в результате укуса инфициро­ванного животного. Причиной многих инфекционных болезней человека являют­ся экскременты инфицированных грызунов (кал, моча, слюна). Примерами могут служить аденовирусные инфекции и геморрагические лихорадки с поражением почек, вызванные буньявирусами.

Некоторые инфекционные агенты, такие как аденоассоциированный парвовирус человека и вирус дельта-гепатита (гепатит D), для развития заболевания требуют коинфекции с участием так называемого вируса-помощника. Инфекция, обусловленная дельта-вирусом, зависит от сопутствующей инфекции, вызванной вирусом гепатита В, и не развивается в его отсутствие. Многие детали эпидемио­логии этих вирусов требуют своего уточнения. Аденоассоциированный парвовирус человека существенно не изменяет течения заболевания, вызванного аденовирусом-помощником. Напротив, коинфекция вирусного гепатита В и D часто оканчивается злокачественным гепатитом.

Диагностика вирусных болезней. Диагностика таких вирусных болезней, как корь, может быть осуществлена на основании клинических признаков. В других случаях с помощью клинических данных можно лишь идентифициро­вать группу вирусов, которые, вероятнее всего, являются возбудителями болез­ней той или иной категории. Однако, как правило, бывает необходимо устано­вить точный диагноз, так как имеющиеся антивирусные препараты обладают высокой избирательной активностью по отношению к определенным типам ви­русов. Для постановки точного диагноза необходимо воспроизвести вирус у экс­периментального животного или в культуре ткани, идентифицировать вирус или выделить вирусспецифические антигены или вирусные нуклеиновые кислоты из тканей или жидкостей организма, или документально зарегистрировать специфи­ческие серологические реакции. Врач должен обеспечить взятие необходимых для диагностического исследования проб материала в соответствующую фазу заболевания, проследить, чтобы они были быстро отправлены в лабораторию, снабдить диагностические лаборатории адекватной клинической информацией.

Если заболевание сопровождается диареей или другими желудочно-кишеч­ными расстройствами, этиология которых напоминает вирусную, вирус следует выделить из свежей порции фекалий. При заболеваниях дыхательной системы, включая фарингит, круп, бронхиолит и пневмонию, материал для исследований лучше всего получать путем аспирации слизи. Мазки из носоглотки и горла менее информативны. При наличии везикулярной сыпи материалом для исследования служит жидкость, аспирированная из пузырьков с помощью иглы. Если сыпь имеет петехиальный или макулопапулезный характер, то следует собирать как пробы слизи из носоглотки, так и фекалии. У пациентов с заболеваниями цен­тральной нервной системы, природа которых позволяет предположить вирусную, включая менингит, энцефалит, миелит и синдром Гийена—Барре, для исследова­ния следует собирать назофарингеальный аспират, фекалии и пробы спинномоз­говой жидкости. При подозрении на инфекцию, вызванную ЦМВ, паповавирусами, корь или эпидемический паротит целесообразно исследовать мочу. Попытку выделить вирус из крови можно предпринять при подозрении на инфекции, вызванные некоторыми арбовирусами, вирусами герпеса и ЛСМ. Для диагностики бешенства и эпидемического паротита исследуют слюну. Биопсия мозга может потребоваться при диагностике энцефалита, вызванного вирусом простого гер­песа, прогрессирующей мультифокальной лейкоэнцефалопатии, подострого склерозирующего панэнцефалита (ПСПЭ), прогрессирующего краснушечного панэнцефалита и медленных вирусных инфекций, таких как болезнь Крейтцфельда— Якоба.

Препараты мазков из носоглотки или прямой кишки следует помещать в соответствующую среду для транспортировки, которая представляет собой не­сколько миллилитров нейтрального изотонического раствора поваренной соли с добавлением небольшого количества белка или сыворотки животных и анти­биотиков. В случае задержки транспортировки препаратов их следует поместить во фляжку-термос, заполненную кусочками льда. После того как препараты доставлены в вирусологическую лабораторию, их следует поместить в соответст­вующие условия для дальнейшей обработки. Препараты могут храниться в обычном холодильнике при температуре 4°С не более 48 ч. Более длительное хранение должно осуществляться при температуре —70°С. При многократном замораживании и оттаивании многие вирусы быстро теряют инфекционную активность.

Выделение вируса из клинического препарата осуществляется путем посева материала на культуру тканей, куриные эмбрионы или инокуляции новорожден­ным мышам. Метод культуры тканей подразумевает использование первичных клеточных культур, изготовленных из органов животных (например, клетки почек обезьяны); линии диплоидных клеток человека, таких как фибробласты эмбриона Wi-38 и перевиваемые клеточные линии типа HeLa, HEp-2, BHK-21 и Vero. Не­которые вирусы лучше растут на одних клеточных линиях, другие — на других. Вирус гриппа следует выделять путем инокуляции вируссодержащего материала в амниотическую или аллантоисную полость куриного эмбриона. Интраперитонеальная и интрацеребральная инокуляция новорожденным мышам рекомендует­ся для выделения вируса Коксаки А, а также многих арбовирусов, вируса бе­шенства, аренавирусов и орбивирусов. Для выделения вируса ЛСМ могут быть использованы взрослые мыши или морские свинки. Идентификация агента, от­ветственного за возникновение медленной вирусной инфекции, например куру и болезнь Крейтцфельда—Якоба, может потребовать внутричерепной инокуляции материала высшим приматам, например шимпанзе. Специальные методы изоля­ции вируса с использованием искусственной среды ткани мозга необходимы для идентификации вируса кори в случае ПСПЭ или вируса краснухи у больных с прогрессирующим краснушечным панэнцефалитом.

После заражения вируссодержащим материалом клеточной культуры послед­нюю исследуют на наличие отличительных признаков цитопатического действия ЩПД). Такие вирусы, как НСВ и многие энтеровирусы, оказывают раннее ЦПД, в то время как для выявления ЦПД, вызванного ЦМВ, вирусом краснухи и не­которыми аденовирусами, требуется наблюдать за клеточными культурами в те­чение недель и даже выращивать субкультуры. В культивируемых клетках ищут признаки их лизиса и вакуолизации. Присутствие синцития свидетельствует о возможном наличии НСВ, PC-вируса, вируса кори или эпидемического паро­тита. Окрашивание клеточных культур по Гимзе или с использованием других красителей облегчает поиск и обнаружение различных внутриклеточных включе­ний. Иммуноцитохимическое окрашивание клеточных культур для выявления вирусных антигенов с использованием флюоресцеина или специфических анти­вирусных антител, связанных с ферментом, способствует обнаружению и иденти­фикации многих вирусов, оказывающих минимальный ЦПЭ. Орто- и парамиксовирусы (вирусы гриппа, парагриппа, кори, эпидемического паротита) могут быть обнаружены по способности инфицированных культур тканей адсорбировать эритроциты (гемадсорбция). Вирус краснухи выявляют по способности инфицированных культур блокировать ЦПЭ, вызванный другим вирусом (интерференция).

Идентификация вирусных частиц или антигенов в тканевых препаратах пред­ставляет собой другой важный метод диагностики вирусной инфекции. Окраши­вание соскоба кожи, взятого из основания пузырька, по методу Tzanck с при­менением красителя Райта или Гимзы помогает идентифицировать вирус простого герпеса или вирус ветряной оспы. Аналогичные методики позволяют идентифи­цировать клетки, инфицированные ЦМВ в осадке мочи, или клетки, инфициро­ванные вирусом кори, в соскобах, взятых из пятен Коплика. В некоторых слу­чаях важную диагностическую информацию можно получить при электронно-микроскопическом исследовании специально подготовленных препаратов. Концен­трация вирусных частиц в таких препаратах должна быть более 10⁶⁷ частиц в 1 мл. Применение специального метода концентрации вируса в препарате путем адсорбции избытка жидкости и солей на поверхности агарозы позволяет обна­ружить вирус при его концентрации всего 10⁴ частиц в 1 мл (метод псевдореп­ликации). С помощью электронной микроскопии можно без труда отличить вирус оспы коров от вируса ветряной оспы в везикулярной жидкости, отрицательно окрашиваемой фосфотунгусной кислотой. Кроме того, электронная микроскопия может быть чрезвычайно полезна при идентификации таких кожных вирусов, как вирус папилломы человека, вирус контагиозного пустулезного дерматита и контагиозного моллюска. Использование специфической антисыворотки для аг­регации вируса в препарате фекалий облегчает электронно-микроскопическое выявление ротавирусов, вируса гепатита А и вируса Норфолк. Электронно-микроскопические исследования препаратов биопсии мозга могут позволить иден­тифицировать энцефалит, вызванный вирусом простого герпеса, ПМЛ и ПСПЭ.

Обнаружение вирусспецифических антигенов облегчается при использовании методов иммунофлюоресценции и иммуноцитохимии. Ценность этих методов осо­бенно высока при диагностике бешенства, герпетической инфекции, ПМЛ и ПСПЭ в препаратах биопсии мозга; герпетического кератита в соскобах роговицы; ви­руса простого герпеса, ветряной оспы и оспы коров в соскобах пузырьков; пара-гриппа, гриппа и РСВ-инфекции в аспиратах слизи из носоглотки: гепатита В в препаратах биопсии печени; вируса колорадской клещевой лихорадки в кро­вяном сгустке. Вирусные антигены могут быть обнаружены в препаратах этих тканей при использовании вирусспецифических антител, прямо или косвенно связанных с флюоресцеинизотноцианатом (ФИТЦ) или ферментами, включая пероксидазу из хрена, щелочную фосфатазу и глюкозоксидазу. Использование антител, связанных с ферментами, обладает рядом преимуществ по сравнению с обычной световой микроскопией: при этом повышается чувствительность, сохранность окрашенных препаратов, их диагностическая ценность. Сочетание биотинсвязанных антител с авидинсвязанным ФИТЦ или ферментами позволит повысить результативность иммуноцитохимических методов. Для выявления ви­русных антигенов используют радиоиммунный анализ и твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), методы, хорошо зарекомендовавшие себя при диаг­ностике гепатита А и В, ротавирусов, аденовирусной инфекции.

Обнаружение четырехкратного или более повышения титра антител к специ­фическому вирусному агенту в сыворотке больного в острой фазе заболевания или на стадии выздоровления (3—4 нед спустя) принято рассматривать в ка­честве диагностического признака острой инфекции. Однократно проведенное ис­следование лишь в редких случаях позволяет диагностировать вирусную бо­лезнь. Высокий титр антител против достаточно редко встречающегося агента при наличии типичной клинической ситуации или необычный титр антител к ви­русному антигену специфического типа дают основание лишь предположить на­личие острой инфекции. В подобных случаях необходимо серологическое иссле­дование крови. Кровь собирают в стеклянные пробирки без антикоагулянтов или консервантов, получают сыворотку и дают ей свернуться и замораживают для дальнейшего хранения. При исследовании в сыворотке определяют антитела различного типа, включая нейтрализующие, комплементсвязывающие и подав­ляющие гемагглютинацию. Скорость реакций, чувствительность и специфичность их при выявлении различных антител существенно варьируют.

Большое значение при проведении эпидемиологических исследований и ус­тановлении происхождения некоторых типов изолированных вирусов имеет рестрикционный ферментативный анализ геномов вирусов, содержащих ДНК (вирус простого герпеса, ветряной оспы, ЦМВ), и получение олигонуклеотидных от­печатков рибонуклеазы t₁ расщепленных геномов РНК-вирусов (грипп, вирус Денге). Для обнаружения вирусных геномов в тканевых препаратах используют гибридизацию in situ. Выявление вирусных нуклеиновых кислот в препаратах тканей и жидкостей организма с применением клонированных вирусспецифиче­ских нуклеокислотных зондов представляет собой еще один метод непосредст­венной идентификации вирусных патогенов.

Профилактика вирусных болезней. Вакцины. Имеющиеся в настоящее время вакцины содержат инактивированные вирусы, вирусы с ослабленной виру­лентностью или вирусные субъединицы, способные вызывать активную иммуниза­цию. Существуют вакцины, инактивированные формалином или бета-пропиолактоном, против бешенства, гриппа и полиомиелита. Штаммы, используемые для создания инактивированной противогриппозной вакцины с содержанием цель­ного вируса, ежегодно подвергаются спецификации Администрацией по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных средств. Вакцина состоит из естественных изолированных штаммов вируса гриппа, инактивированного форма­лином, и созданных в лабораториях путем рекомбинации вирусных штаммов, содержащих гены гемагглютинина и нейраминидазы вирусов гриппа, в настоящее время циркулирующих во внешней среде. У 60—80% иммунизированных лиц наблюдается уменьшение частоты или тяжести гриппозной инфекции. Синдром Гийена—Барре (острый первичный идиопатический полирадикулоневрит) был от­мечен у 1 из 100000 лиц, подвергшихся вакцинации свиной противогриппозной вакциной за период 1976—1977 гг. Однако в дальнейшем возникновение этого заболевания не коррелировало с введением препаратов противогриппозной вак­цины. Убитая поливакцина используется в Швеции, Финляндии и Нидерландах; в Дании — в комбинации с живой вакциной. Но в США она была потеснена жи­вой пероральной вакциной Сабина, применяемой лишь у больных с иммуно­дефицитом.

Дата добавления: 2014-11-20