Методы стерилизации

Приготовленные среды, как правило, стерилизуют (Sterilis - бесплодный). Методы стерилизации (обеспложивания) основаны на двух принципах:

а) уничтожение клеток микроорганизмов и их спор в питательных средах, на посуде, инструментах и других предметах – методы термической и лучевой (холодной) стерилизации;

б) отделение клеток микроорганизмов – метод фильтрования (холодная стерилизация).

I. Холодная стерилизация:

1) Фильтрование;

2) стерилизация ультрафиолетовыми лучами;

3) химическая стерилизация и дезинфекция.

II. Термическая стерилизация:

1) прокаливание на пламени (фламбирование);

2) стерилизация сухим жаром;

4) стерилизация текучим паром – тиндализация;

5) пастеризация;

6)стерилизация насыщенным паром под давлением – автоклавирование.

Приготовление мясопептонного агара (МПА).

Наиболее распространенной средой, на которой растет большинство микроорганизмов, использующих органические формы азота, является МПА.

Для приготовления 1 л среды необходимо сделать следующее:

1) в термостойкую колбу на 1500-2000 мл положить 2 мясных кубика, высыпать 5 г глюкоза (0,5%), 5 г сахара (0,5%), 10г пептона (1%);

2) добавить 1000 мл дистиллированной воды;

3) колбу с ингредиентами поставить на водяную баню для расплавления агар – агара, которого добавляем 20г (2%); (температура плавления агара 100⁰С, застывания - 40⁰С);

4) установить слабо щелочную реакцию среды (большинство микроорганизмов развивается лучше на средах с рН 7,0-7,2), для чего использовать 20%-й раствор Na₂Co₃; реакцию среды проверить лакмусовой бумажкой, смоченной дистиллированной водой. Более удобно использовать индикатор бромтимолблау, имеющей в нейтральной среде бутылочно-синий, в кислой – желтый цвет. 1-2 капли индикатора внести в фарфорную чашечку и стеклянной палочкой добавить 1-2 капли расплавленного МПА;

5) разлить среду по пробиркам и колбам, закрыть ватными пробками, завернуть плотной бумагой. Посуду со средой поместить в автоклав и стерилизовать 30 мин при давление в 1атм. После стерилизации пробирки с еще не застывшей средой раскладывают на ровной поверхности стола в наклонном (под небольшим углом) положении для получения скошенной поверхности агара. Это так называемые косяки, косые или скошенные среды. Плотная среда, застывая при вертикальном положении пробирки, называется столбиком.

Контрольные вопросы

1. Подразделение питательных сред по: а) составу; б) назначению; в) физическому состоянию.

2. Термическая стерилизация:

способы и характеристика.

3. Холодная стерилизация:

способы и характеристика.

4. Подготовка сред к стерилизации и их стерилизация.

5. Подготовка посуды к стерилизации. Какими способами ее стерилизуют?

Дата добавления: 2014-12-10