Жилых помещений

Критерии для санитарной оценки воздуха

(число микроорганизмов в 1 м³ воздуха) по А.И.Шафиру

Оценка воздуха	Летний режим	Зимний режим
Чистый	Менее 1500	Менее 4500
Грязный	Более 2500	Более 7000

Работа 11. Выделение и количественный учет микроорганизмов почвы методом прямого счета С.Н. Виноградского

Оборудование: почвенные образцы, весы, разновесы, стерильные часовые стекла, ступки, резиновые перчатки, скальпели, пинцеты, колбы с 45 мл стерильной дистиллированной воды, стерильные пипетки на 0,1-0,2 мл, обезжиренные предметные стекла, 5-процентный раствор карболового эритрозина, 100-процентный этиловый спирт, микроскопы с иммерсионной системой, объектив-микрометр.

Ход работы

1. Небольшое количество почвы растирать в течение 10 минут в стерильной ступке пальцем в резиновой перчатке.

2. На стерильном часовом стекле отвесить 5 г почвы и перенести ее в колбу с 45 мл стерильной дистиллированной воды, получая разведение 1:10.

3. Встряхивать колбу 5 минут, отстоять 3-5 секунд и стерильной пипеткой перенести 0,01 мл взвеси на обезжиренное предметное стекло.

4. Распределить мазок по вычерченному заранее квадрату площадью 4 см² стерильной иглой.

5. Мазок высушить, зафиксировать, прокрасить карболовым эритрозином в течение 30 минут.

6. Промыть, высушить препарат.

7. Микроскопировать с полной иммерсионной системой, производя подсчет микроорганизмов.

Подсчет ведут в трех-пяти полях зрения микроскопа (при более точных методиках - в 50-100).

8. Рассчитать количество микроорганизмов в 1 г почвы по формуле:

,

где α – среднее количество микроорганизмов в поле зрения микроскопа, S – площадь мазка (400 мм²), S ₁ – площадь поля зрения микроскопа (π r ²), 0,01 – капля суспензии для мазка (мл), 5 – навеска почвы (г).

9. Сделать вывод о микрофлоре почвы, опираясь на данные С.Н. Виноградского: бедные почвы – 200-500 млн. бактерий в 1 г почвы; средние – до 1 млрд.; богатые – до 2 млрд. и выше.

Работа 12. Анализ микрофлоры воды из различных источников.

Определение общего микробного числа

Оборудование: пробирки со стерильным МПА (СПА), стерильные чашки Петри, стерильные пипетки на 1 мл, пробирки с 9 мл стерильной воды, спиртовки, пробы воды из разных источников, карандаш по стеклу, шпатель.

Ход работы

1. Соблюдая стерильность, приготовить три разведения пробы: 1:10, 1:100, 1:1000.

2. Разлить МПА (СПА) в чашку Петри.

3. 0,1 мл воды третьего разведения стерильной пипеткой перенести в чашку Петри и разровнять шпателем по поверхности застывшей среды.

4. Через 5-7 дней подсчитать число колоний в чашке Петри и определить количество бактерий в 1 мл воды (умножая на разведение).

5. Данные оформить в таблицу:

Источник воды	Кол-во микроорганизмов в 1 мл воды

6. Определить сапробность зоны водоема, сравнить со следующими нормами:

- олигосапробная – 10 - 1000 бактерий в 1 мл;

- мезосапробная – до 100 000 бактерий в 1 мл;

- полисапробная – до 1 000 000 бактерий и более в 1 мл.

Работа 13. Измерение объектов

Измерять клетки микроорганиз­мов (в мкм) можно на фиксированных и живых препаратах с помощью шкалы окулярного микрометра — окулярной ли­нейки. У кокков определяют диаметр клеток, у бактерий дру­гой формы — длину и ширину.

Оборудование: фиксированные или живые препараты (дрожжи), предметные и покровные стекла, микробиологические петли, окулярная ли­нейка, микроскоп.

Ход работы

1. Вставляют окулярную линейку шкалой вверх на диафрагму окуляра, предварительно вывинтив линзу окуляра.

2. Затем ставят препарат и определяют, скольким делениям линейки соответствует длина и ширина клетки. Измеря­ют не менее 10—20 клеток.

3. Чтобы рассчитать истинные размеры клеток, определяют цену деления окулярной линейки с помощью объектного мик­рометра. Последний представляет собой металлическую плас­тинку в форме предметного стекла с отверстием в центре; в от­верстие помещено стекло с линейкой (шкала из 100 делений). Общая длина шкалы объектного микрометра — 1 мм, величи­на одного деления — 10 мкм (0,01 мм).

4. Для определения цены деления окулярной линейки объ­ектный микрометр помещают вместо препарата на столик микроскопа и фокусируют изображение линейки при малом увеличении. Затем линейку перемешают в центр поля и меня­ют объектив на тот, при котором измеряли клетки. Передвигая столик микроскопа и поворачивая окуляр, устанавливают объ­ектный и окулярный микрометры так, чтобы их шкалы были параллельны и одна перекрывала другую. Определение цены деления окулярного микрометра проводят по принципу нони­уса, т. е. совмещают одну из черт шкалы окулярного микро­метра с чертой объектного микрометра и находят следующее совмещение. Допустим, в двух делениях объектного микромет­ра (20 мкм) умещается пять делений окулярного микрометра, тогда одно деление окулярного микрометра при данном увели­чении равняется 4 мкм (20: 5). Зная, скольким делениям оку­лярной линейки соответствует длина и ширина изучаемых кле­ток, умножают цену деления окулярного микрометра на эти числа. Полученные значения цены делений окулярной линейки справедливы только для данной системы окуляр — объектив.

Работа 14. Микрофлора слизистой оболочки полости рта и зубного налета

В полости рта обнаруживается более 100 видов микроорганизмов. Среди них дрожжи, стрептококки, стафилококки, крупные палочки, спирохеты, вибрионы и т.д.

Оборудование: спички, спиртовка, предметные стекла, краситель (фуксин или метиленовый синий), микроскоп с иммерсионной системой.

Ход работы

1. Спичкой взять кусочек зубного налета, перенести в каплю воды на предметное стекло, сделать мазок.

2. Мазок зафиксировать и покрасить.

3. Микроскопировать с иммерсионной системой, отмечая разнообразие форм микроорганизмов (рис 5).

4. Зарисовать.

Рис. 5. Микрофлора зубного налета

Работа 15. Микрофлора кожных покровов

Оборудование: пробирки со стерильным МПА (СПА), чашки Петри, микроскоп с иммерсионной системой, краситель.

Ход работы

1. Разлить агар в две чашки Петри.

2. Прикоснуться к застывшей агаровой пластинке одной чашки грязными руками, другой – чистыми.

3. После инкубации в течение 3-5 дней при t = 25-30ºС подсчитать колонии, сделать выводы.

4. Микроскопировать окрашенные мазки разных колоний, выполнить соответствующие рисунки.

Тема 5. ПОЛУЧЕНИЕ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР.

ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ МИКРООРГАНИЗМОВ С ЦЕЛЬЮ ИХ ИДЕНТИФИКАЦИИ (4 ч)

Идентификацию микроорганизмов проводят путем изучения морфологических, культуральных и физиологических свойств.

Морфологические свойства исследуются при микроскопировании, культуральные устанавливаются по особенностям роста на питательных средах (рис. 6), физиологические изучаются при выращивании на дифференциально-диагностических средах.

Работа 16. Получение чистой культуры бактерий

Оборудование: чашки Петри с колониями, полученными при анализе воздуха, микробиологические иглы, спиртовка, пробирки со стерильными питательными средами: МПА (СПА) прямой, МПА (СПА) косой, МПБ, МПЖ, молоко, картофельные среды.

Ход работы

Описание выбранной колонии

Описание проводят по схеме:

1. Размер колонии: точечные (Д меньше 1 мм), средние (Д – 2-4 мм), крупные (Д – 4-6 мм и более).

2. Форма (округлая, неправильная, амебовидная, ризоидная, мицелиальная).

3. Оптические свойства (прозрачная, матовая, флюоресцирующая, полупрозрачная, непрозрачная, блестящая).

4. Цвет и выделение пигмента в среду.

5. Поверхность (гладкая, шероховатая, складчатая, бугристая).

6. Профиль (плоский, выпуклый, кратерообразный, конусовидный).

7. Край (ровный, волнистый, лопастной, ризоидный).

8. Структура (однородная, мелко- и крупнозернистая, струйчатая, волнистая).

9. Консистенция (маслянистая, тестообразная, вязкая, пленчатая).

Составив описание колонии, делают пересев в чистую культуру на твердые и жидкие среды.

Рис. 6. Характеристика колоний:

форма: а – округлая, б – неправильная, в – амебовидная, г – ризоидная, д – мицелиальная; профиль: а – плоский, б – выпуклый, в – кратерообразный, г – конусовидный; край: а – ровный, б – волнистый, в – лопастной, г – бахромчатый; структура: а – однородная, б – мелкозернистая, в – крупнозернистая, г – струйчатая, д – волнистая.

Пересев микроорганизма в чистую культуру

А. На прямой МПА (СПА) (микробиологической иглой):

1. Берут микробиологическую иглу в правую руку (рис. 7), прокаливают ее на пламени спиртовки, дают остыть, приоткрывают чашку Петри, дотрагиваются до агара (агар не должен плавиться), захватывают часть выбранной колонии.

Рис. 7. Посев культуры микроорганизмов в пробирки со средой:

а, е – стерилизация петли; б – стерилизация краев пробирки;

в, г – взятие и посев материала; д – закрытие пробирок пробками

2. Тремя пальцами левой руки берут пробирку с агаром, мизинцем и безымянным пальцем правой руки вынимают из нее ватную пробку, обжигают края.

3. Вводят иглу в пробирку, вертикально делают укол почти до дна, вынимают иглу.

4. Обжигают горло пробирки и пробку, закрывают пробирку, этикетируют.

Б. На косой МПА (СПА) (микробиологической петлей):

1. Разогревают агар и размещают на подставке для косого наклона среды. Среда должна иметь наибольшую площадь и не должна касаться пробки.

2. Соблюдая те же правила, что и при посеве уколом, совершают посев штрихом по поверхности агара. Этикетируют.

Посев на дифференциально-диагностические среды

Из выращенной чистой культуры, соблюдая правила стерильности, производят посев на: 1 – МПБ, 2 – МПЖ, 3 – молоко, 4 – картофельную среду. В МПЖ – уколом иглой, в остальные – микробиологической петлей или шпателем Дригальского (рис. 8).

Рис. 8. Посев микроорганизмов на поверхность плотной среды в чашках Петри:

а – шпатель Дригальского; б – положение чашки и руки при посеве шпателем; в – рост микроорганизмов после рассева шпателем; г - рост микроорганизмов после рассева петлей

Работа 17. Окраска бактерий по Граму

Оборудование: пробирки с чистой культурой, обезжиренные предметные стекла, петли, спиртовка, кристаллизатор с подставкой, промывалка с водой, однопроцентный раствор кристаллвиолетта, раствор Люголя, 95-процентный этанол (ацетон), 0,1-процентный раствор фуксина, микроскоп с иммерсионной системой.

Ход работы

1. Тонкий мазок высушить, зафиксировать, нанести раствор кристаллвиолетта на 1-2 минуты.

2. Залить раствором Люголя на 1-2 минуты.

3. Промыть водой и этанолом (ацетоном) в течение 60 сек или в течение 10 сек.

4. Промыть водой. Докрасить фуксином 2 мин.

5. Высушить. Микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в сиренево-фиолетовый цвет, грамотрицательные – в малиновый.

Работа 18. Обнаружение капсул на негативном прижизненном

препарате

Оборудование: чистая культура, предметные стекла, карболовый фуксин Циля, черная тушь, спиртовка, петли, микроскоп.

Ход работы

1. Каплю культуры на предметном стекле окрасить фуксином в течение 2-3 минут.

2. Прибавить черную тушь, накрыть покровным стеклом.

3. Микроскопировать (рис. 9). Зарисовать в альбом.

Рис. 9. Капсулы у бактерий

Работа 19. Окраска спор

Оборудование: предметные стекла, петли, исследуемая культура, спиртовка, фильтровальная бумага, кристаллизатор с подставкой, промывалка с водой, однопроцентный раствор серной кислоты, пятипроцентный раствор хромовой кислоты, карболовый фуксин Циля, раствор метиленового синего (1:40), микроскоп с иммерсией.

Ход работы

1. Приготовить мазок, высушить, зафиксировать. Протравить пятипроцентным раствором хромовой кислоты в течение 5 минут.

2. Промыть водой, залить карболовым фуксином Циля. Окрашивать в течение 5 минут, нагревая над пламенем до появления паров и добавляя краситель.

3. Промыть, обесцвечивать в течение 2 минут серной кислотой.

4. Промыть, докрасить метиленовым синим в течение 10-15 минут.

5. Промыть, высушить, микроскопировать. Клетки должны быть синими, а споры - красными.

Работа 20. Обнаружение запасных включений

Оборудование: предметные и покровные стекла, петли, спиртовка, вода, пинцет, фильтровальная бумага, кристаллизатор с подставкой, микроскоп с иммерсией, метиленовый синий (1:40), раствор Люголя, судан III, 40-процентный формалин, исследуемая культура.

Ход работы

Дата добавления: 2014-12-17