Изучение второй фазы нитрификации

Изучение первой фазы нитрификации

1. Провести качественную реакцию на присутствие азотистой кислоты: в фарфоровую палетку внести 3 капли цинк-йод-крахмала и 1 каплю разбавленной H₂SO₄, туда же – каплю исследуемой жидкости. В присутствии азотистой кислоты жидкость окрашивается в темно-синий цвет. Реакция идет следующим образом:

ZnCl₂ + ZnY₂ + 2H₂SO₄ = 2ZnSO₄ + 2HCl + 2HY

2HNO₂ + 2HY = 2H₂O + 2NO + Y₂

Йод вступает во взаимодействие с крахмалом.

По интенсивности окраски сделать вывод о содержании азотистой кислоты.

2. Приготовить постоянный препарат культуральной жидкости и изучить его под иммерсионным объективом микроскопа. При изучении выявляются бактерии p. Nitrosomonas в виде овальных палочек.

1. Проверить наличие остатка азотистой кислоты реактивом цинк-йод-крахмал. Если вторая фаза нитрификации прошла до конца, проба будет отрицательной.

2. В отсутствии азотистой кислоты провести качественную реакцию на азотную кислоту. Для этого в фарфоровую палетку внести 3-4 капли концентрированной серной кислоты и несколько кристаллов дифениламина, добавить каплю исследуемой среды. При наличии азотной кислоты жидкость окрашивается в темно-синий цвет. Следует иметь в виду, что азотистая кислота с дифениламином также дает синее окрашивание.

3. Приготовить фиксированный препарат и изучить его, пользуясь иммерсией. Род Nitrobacter представлен короткими палочками (рис. 16).

4. Зарисовать наблюдаемые формы. Результаты опытов занести в таблицу:

Вариант опыта	Наличие нитритов	Наличие нитратов
Первая фаза
Вторая фаза

Обозначения: + - слабая окраска; ++ - средняя; +++ - интенсивная; ++++ - очень интенсивная.

Рис. 16. Нитрифицирующие бактерии: 1 – Nitrosomonas, 2 – Nitrodacter

Работа 28. Денитрификация

Оборудование: элективная питательная среда: сегнетовая соль – 2 г, KNO₃ – 0,2 г, K₂HPO₄ – 0,05 г, MgSO₄ – 0,02 г, вода – 100 мл (вместо соли винной кислоты можно взять лимоннокислый натрий или калий); колбы на 50 мл или пробирки, почва, дифениламин, концентрированная серная кислота, фарфоровые палетки, петли, однопроцентный раствор фуксина, спиртовки, предметные стекла, микроскопы с иммерсией.

Ход работы

Закладка элективной культуры

1. Разлить среду в высокие пробирки или в колбы до горлышка. Заразить комочком почвы. Плотно закрыть пробками.

2. Инкубировать при t = 35ºС в течение 7-12 суток.

3. Следить за ходом денитрификации по исчезновению нитратов (проба с дифениламином), отмечая появления аммиака.

Дата добавления: 2014-12-17