Современные методы определения количества лимфоцитов

В настоящее время для определения разных популяций и субпопуляций лимфоцитов крови используется реакция иммунофлуоресценции,или иммунофлуоресцентный метод.

Иммунофлуоресцентный метод позволяет идентифицировать различные клеточные популяции, несущие специфические поверхностные антигены (CD-антигены – от англ. – Clasters of differentiation) и соответственно этому окрашенные различными флуоресцентно меченными моноклональными антителами.

Принцип этого метода заключается в идентификации дифференцировочных маркерных антигенов на поверхности клеток (в большинстве случаев – на лимфоцитах). Для определения поверхностных маркеров в суспензию клеток добавляют моноклональные антитела против CD-антигенов клетки, меченные ФИТЦ (флуоресцеин-изотиоцианатом), дающим зеленую флуоресценцию, или меченные ТРИЦ (тетраметилрома-дин-изотиоцианат) или фикоэритрином, дающими красное свечение. Окрашенные клетки анализируют на проточном цитофлуориметре или просматривают с помощью флуоресцентного микроскопа. При проточной цитофлуориметрии поток клеток проходит через тончайший капилляр, на который падает возбуждающий люминесценцию луч света. Каждая светящаяся клетка регистрируется специальным детектором в виде импульса. Прибор автоматически обрабатывает информацию и выдает результаты в виде гистограммы - графика распределения клеток с разной интенсивностью свечения (рис. 53).

Для просматривания под флуоресцентным микроскопом суспензию клеток переносят на предметное стекло, высушивают, наносят иммерсионное масло и смотрят препарат под объективом х90. Наблюдение следует проводить в затемненном помещении.

Иммунофлуоресцентные методы также используются для обнаружения аутоантител и антител к тканевым и клеточным антигенам в сыворотках пациентов с аутоиммунными заболеваниями.

Рисунок 53. Проточная цитофлуориметрия

Используя широкий набор моноклональных антител, можно определить количественное содержание в крови не только Т- (CD2⁺, CD3⁺) и В-лимфоцитов (CD19⁺, CD20⁺, CD22⁺, CD72⁺), но и субпопуляций Т-лимфоцитов: Т-хелперов (CD4⁺), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8⁺) и NK – клеток (CD16⁺, CD56⁺).

Кроме того, с помощью данного метода можно определять наличие на клетках врожденной и адаптивной иммунной систем рецепторов к цитокинам, другим медиаторам, а также экспрессию на них активационных маркеров и молекул клеточной адгезии. Перечень некоторых МКАТ, детектирующих указанные клетки и структуры, приведен в табл. 27.

Таблица 27. Моноклональные антитела и детектируемые с их помощью клетки и структуры

Антиген	Распознаваемые клетки
CD 1	кортикальные тимоциты
CD 3, CD 2	Т - лимфоциты
CD 4	Т-хелперы, моноциты
CD 5	Т- лимфоциты и В - лимфоциты
CD 7	все Т-клетки
CD 8	ЦТЛ
CD 10	лимфобласты
CD 11b	C3bi-рецептор C3 компонента комплемента
CD 13	ранние миелоидные клетки
CD 14	гранулоциты, моноциты
CD 15	гранулоциты
CD 16	NK-клетки, моноциты, гранулоциты
CD 17	гранулоциты, моноциты, тромбоциты
CD 18	лейкоциты
CD 20	В-лимфоциты
CD 21	В-лимфоциты
CD 22	В-лимфоциты
CD 24	В-лимфоциты, гранулоциты
CD 25	рецептор интерлейкина-2
CD 45 RA	В-лимфоциты, Т- лимфоциты (40%), NK-клетки
CD 50	лейкоциты
CD 54 (ICAM-1)	активированный цитокинами эндотелий и др. клетки
CD 56 (N-CAM)	NK-клетки, некоторые Т- лимфоциты
CD 71	рецептор трансферрина
CD 72	B-лимфоциты
CD 95 (FAS)	маркер готовности клеток к апоптозу (FAS – рецептор)

Дата добавления: 2014-11-29