Определение общего холестерина крови ферментативным методом

Работа №1.

Оформить лабораторную работу

Вопросы, изученные на предшествующих дисциплинах и необходимые для освоения темы.

Владеть

Основными терминами и понятиями: ГМГ-КоА редуктаза, Желчные кислоты, Желчнокаменная болезнь, ЛПНП-рецепторы, «Обратный» транспорт холестерола, Гиперхолестеролемия и атеросклероз, Дислипопротеинемии, Биохимические основы развития атеросклероза, Семейная гиперхолестеролемия

Органическая химия: ненасыщенные жирные кислоты, эндоперекиси жирных кислот, стероиды.

Задания для самостоятельной подготовки к практическому занятию:

1. Перечень контрольных вопросов для самоконтроля знаний.

1.Обмен холестерина: Реакции биосинтеза до мевалоновой кислоты и далее схема реакций до образования холестерина, тканевые особенности обмена и регуляции.

2. Гиперхолестеринемия, ее причины, последствия.

3. Пищевые вещества, снижающие уровень ХС.

4. Атеросклероз: биохимические причины, метаболические нарушения, биохимическая диагностика, осложнения.

5. Факторы риска в развитии атеросклероза, их механизмы действия, профилактика.

2. Написать в тетрадях реакции биосинтеза холестерина до стадии образования мевалоновой кислоты и письменно ответить на следующие вопросы:

1. из каких веществ синтезируется холестерин;

2. назвать последовательно все промежуточные продукты, возникающие в процессе биосинтеза холестерина до стадии мевалоновой кислоты;

3. сколько молекул активного ацетата и АТФ расходуется на построение одной молекулы холестерина?

4. какие условия (аэробные или анаэробные) должны обеспечивать синтез холестерина;

5. указать регуляторный фермент, участвующий в процессе синтеза холестерина.

6. Какова судьба избытка холестерина в организме? Какими путями он выделяется?

7. Лекарственные перепараты снижающие концентрацию холестерина в крови.

Ориентировочная основа деятельности студентов для проведения лабораторной работы:

Принцип метода. При гидролизе холестеридов холестерол-эстеразой образуется свободный холестерол. Общий (свободный и образовавшийся в результате гидролиза) холестерол окисляется кислородом воздуха под действием холестеролоксидазы с образованием эквимолярного количества пероксида водорода. В присутствии пероксидазы пероксид водорода окисляет фенол с образованием бензохинона, окрашенного в розовый цвет. Интенсивность окраски пропорциональна количеству холестерола в пробе:

Ход работы.

В три пробирки приливают реактивы в следующей последовательности: в первую (опыт) – 0,01 мл сыворотки или плазмы крови, во вторую (стандарт) – 0,01 мл стандартного раствора холестерола, содержащего 5,17 ммоль/л (т.е. 200 мг%) и в третью (контроль) – 0,01 мл дистилированной воды.

Во все три пробирки наливают по 1 мл рабочего реагента, содержащего ферменты и фенол. Пробы помещают в термостат на 10 минут при 37 ^оС. Затем опытную и стандартную пробы колориметрируют на ФЭКе против контроля в кюветах на 3 мм при длине волны 490-500 нм.

Оформление работы

1. Рассчитайте количество холестерола в исследуемой пробе по формуле:

С = Е_о/Е_ст. ´ 5,17 [ммоль/л] или

С = Е_о/Е_ст. ´ 200 [мг%],

где Е_о – экстинкции опыта,

Е_ст. – экстинкция стандарта,

С – количество общего холестерола.

2. Сравните полученные результаты с нормой и сделайте выводы.

Количество общего холестерола в сыворотке крови здоровых людей разного возраста равно:

20-29 лет – 3,72-7,11 ммоль/л (144-175 мг%),

30-39 лет – 4,27-7,63 ммоль/л (165-295 мг%),

40-49 лет – 4,40-8,15 ммоль/л (170-315 мг%),

старше 50 лет – 4,58-8,79 ммоль/л (177-340 мг%).

Клинико-диагностическое значение.

Гиперхолестеринемия – увеличение холестерина в крови, сопровождает гиперлипопротеинемии IIA, IIB, III типов; заболевания печени, холестаз, нефротический синдром, злокачественные опухоли поджелудочной железы и простаты, сахарный диабет и другие заболевания. Гиперхолестеринемия является фактором риска развития атеросклероза и одним их биохимических тестов патологии.

Гипохолестеринемия наблюдается при болезнях печени (цирроз в поздней стадии заболевания, острая дистрофия печени), голодании, сепсисе, гиперфункции щитовидной железы и др.

Работа №2.

Дата добавления: 2014-12-27