Обезвоживание, уплотнение и заливка материала в парафин

Депарафинизирование гистологических срезов (подготовка срезов к окраске)

Приготовление адгезивной смеси на основе сыворотки

Приготовление смеси белка с глицерином

Приготовление адгезивной среды

Оснащение: химический стакан, бюкс с притертой крышкой, воронка, фильтровальная бумага

Реактивы: яичный белок, глицерин, тимол

Алгоритм действий:

1.Отделить яичный белок от желтка и поместить его в химический стакан

2.Взбить яичный белок

3.Профильтровать белок через крупнопористый фильтр, смоченный дистиллированной водой

4.Добавить равный объем глицерина и несколько кристаллов тимола

5.Перемешать

6.Хранить в холодильнике несколько месяцев

Оснащение: бюкс с притертой крышкой, пипетки, мерный цилиндр

Реактивы: сыворотка крови, дистиллированная вода, 5% раствор формалина

Алгоритм действий:

1.В приготовленную емкость последовательно отмерить и добавить 15 мл сыворотки, 5 мл дистиллированной воды, 6 мл 5% раствора формалина

2.Перемешать

3.Хранить в холодильнике

Оснащение: вытяжной шкаф, высокие бюксы с притертой крышкой, термостат, фильтровальная бумага, коробка для хранения стекол.

Реактивы: ксилол, спирты различной концентрации (70% - 100%), дистиллированная вода

Алгоритм действий:

1.Поместить срезы в раствор КсилолаI на 3-5 минут, можно в термостате при 37 градусах

2.Перенести срезы в раствор КсилолаПна 3-5 минут

3.Перенести срезы в раствор 100% спирта на 1-2 минуты

4.Перенести срезы в раствор 96% спирта на 1-2 минуты

5.Перенести срезы в раствор 70% спирта

6.Промыть срезы в дистиллированной воде

7.Фильтровальной бумагой удалить остатки воды со стекол

8.Сложить стекла в коробку

Оснащение: термостаты, бюксы/банки с притертой пробкой, фарфоровые стаканы, формочки для заливки, эксикатор, пинцет, водяная баня.

Реактивы: растворы спиртов различной концентрации (70%-100%), ксилол, парафин, смесь парафина и 5% воска.

Алгоритм:

1 этап — обезвоживание:

- промытый материал поместить в 50% спирт на 1-3 часа

- перенести в 70% спирт на 3-6 часов

- перенести в 96% спирт 1 порция на 3-6 часов

- перенести в 96% спирт 2 порция на 3-6 часов

- поместить в 100% спирт на 3-6 часов

2 этап — уплотнение:

- материал поместить для пропитывания в ксилол (1-я порция) по 1-3 часа

- перенести во 2-ю порцию ксилола на 1-3 часа

- поместить материал в смесь ксилола с парафином в соотношении 1:1 в термостате при 37 градусах на 3-6 часов

- пропитать материал в парафине (1-я порция) в термостате при 56 градусах на 1,5-2 часа

- перенести материал во 2-ю порцию парафина в термостат при 56 градусах на 1,5-2 часа

3 этап — заливка в парафин (вариант 1):

- приготовить бумажные формочки

- емкость с парафином (2-я порция) перенести на водяную баню

- теплым пинцетом перенести материал в центр бумажной формочки

- заполнить формочку парафином для заливки

- формочки до краев погрузить в холодную воду, пока на поверхности не появится пленка

- формочку полностью погрузить в воду до полного отвердения парафина

3 этап — заливка в парафин (вариант 2):

Заливка материала с использованием модульной системы для заливки в парафин

Оснащение: модульная система для заливки парафин, заливочные формы, пинцет

Реактивы: парафиновая среда для заливки

Алгоритм:

- выбрать заливочную форму в зависимости от размера кусочка

- налить расплавленный парафин в заливочную форму (если в лаборатории нет возможности использовать для заливки готовую гомогенизированную парафиновую среду (например, Histomix), которая уже содержит в своем составе парафин, натуральный воск и синтетические полимерные добавки, то к этой порции парафина следует добавить 5% воска)

- перенести материал из кассеты в заливочную форму

- накрыть заливочную форму крышкой от кассеты

- завершить заливку материала через отверстия кассеты

- поместить блок на поверхность охлаждающего модуля

- отделить кассету с блоком от заливочной формы

- образец готов к микротомии

Дата добавления: 2015-04-30