Микроскопия. Световая микроскопия

Окрашивание срезов и мазков

Перед окрашиванием срезы депарафинизируют и доводят до воды в спиртах нисходящей крепости, после чего стекло со срезами помещают в водный раствор красителя. Клеточные структуры, как правило, не различимы даже пи большом увеличении микроскопа, они бесцветны и прозрачны. Для выявления тканевых компонентов, отдельных клеток и клеточных структур с 50-х годов XIX века используют красители — лиганды с высоким сродством к различным компонентам ткани и с определенными цветооптическими свойствами. Способность тканевых компонентов по-разному окрашиваться зависит от кислотно-основных (щелочных) свойств веществ, входящих в их состав.

Кислые красители (например эозин, конгорот, разные оранжи) связываются со структурами или веществами, имеющими щелочную реакцию. Это ацидофильные (основные) компоненты ткани (например, разные цитоплазматические белки (типичные пример — гемоглобин эритроцитов).

Щелочные красители (гематоксилин, метиленовый синий, толуидиновый синий, азур) связываются с базофильными (кислыми) компонентами ткани (нуклеиновыми кислотами ядра и рибосом).

Стандартные красители. Часто используют смеси кислых и щелочных красителей (например, гематоксилин + эозин). В гематологической практике мазки и срезы окрашивают специальными смесями (гематологические красители).

(вставить рисунок или схему микротома)

Увеличение — физическое свойство линз объектива и окуляра. Увеличение микроскопа приблизительно оценивают как произведение увеличения объектива и увеличения окуляра.

Минимальный размер наблюдаемого объекта определен формулой:

d = 0,61λ/nSinα

где, α — половина угловой ширины конуса световых лучей, собираемых линзами объектива, n — коэффициент преломления среды, отделяющей изучаемых объект от линз объектива или конденсатора, λ - длина волны света, nSinα — апертура.

Разрешение микроскопа — величина, обратная d. Чем больше апертура, тем выше разрешение, но при этом уменьшается глубина резкости. Повысить разрешение можно за счет увеличения апертуры. Увеличить апертуру можно путем увеличения коэффициента преломления. Коэффициент преломления жидких сред (иммерсионные среды) больше коэффициента преломления воздуха. В микроскопии используют несколько иммерсионных сред: масляную, глицериновую, водную.

Предел разрешения светового микроскопа определяется длиной световой волны и апертурой линз. Теоретически возможный предел разрешения светового микроскопа — 0,2 мкм (минимальное расстояние, на котором различимы два объекта).

Оптические артефакты. Объектив состоит из нескольких стеклянных линз. Первая линза — сферическая или полусферическая — предназначена для получения увеличенного изображения. Все остальные линзы корригируют оптические артефакты (аберрации).

Дата добавления: 2015-04-30