Депарафинирование

Нейтральный жир (реакция с суданом III)

Гликозамингликаны (реакция с толуидиновым синим)

Полисахариды (ШИК-реакция)

Белки

РНК. Реакция Браше

Гистохимические методы исследования

Оценка качества приготовления парафиновых срезов

Парафиновый блок должен соответствовать требованиям:

1. Не крошиться, не быть мягким, не плавится при температуре воздуха

2. Быть однородным

3. Хорошо резаться

Парафиновые срезы должны соответствовать требованиям:

1. Ткань не должна отделяться от парафина

2. Хорошо расправляться, не морщится

3. Не закручиваться, не прилипать к поверхности ножа

4. На срезе не должно быть полос или других следов от ножа

5. Срез должен быть тонким, ровным, однородным по толщине

а) Гистохимические методы основаны на специфической реакции между химическим реактивом и определенным компонентом препарата.

б) Образующийся продукт реакции имеет окраску, отличную от окраски исходного реактива.

Реактив — смесь двух красителей: метилового зеленого и пиронина. Пиронин специфически окрашивает РНК в красный цвет, поэтому на препарате ядрышки и скопления рибосом в цитоплазме имеют красный цвет. Остальные структуры ядра окрашиваются в зеленый цвет. Обычно делают и контрольный препарат, который перед окрашиванием обрабатывают рибонуклеазой.

2. ДНК. Реакция Фёльгена

Реактив — фуксинсернистая кислота (реактив Шиффа). ДНК-содержащие структуры окрашиваются в пурпурно-красный цвет.

Используют различные реакции:

а) с бромфеноловым синим (белки окрашиваются в темно-фиолетовый цвет)

б) со смесью нингидрин+реактив Шиффа (белки приобретают красный цвет)

Реактив из смеси реактива Шиффа и периодной кислоты. Периодат способствует образованию в субстрате альдегидной группы, которая взаимодействует с реактивом Шиффа. ШИК-положительные компоненты (гранулы гликогена и т. д.) имеют темно-красный цвет.

При взаимодействии толуидинового синего с веществами, содержащими много кислотных групп, наблюдается метахромазия (изменение окраски с синей на фиолетовую и красную). Подобным свойством обладают, в частности, компоненты амфорного вещества соединительной ткани – гликозаминогликаны (гетерополисахариды с высоким содержанием кислотных радикалов).

Капли жира в жировой клетке окрашиваются в яркий оранжево-красный цвет благодаря растворению в них красителя.

Цель: Удаление парафина со срезов с тем, чтобы их подготовить к дальнейшему окрашиванию.

Техника выполнения:

Батарея депарафинирования включает высокие бюксы или биологические стаканчики, содержащие две порции ксилола- ксилол I и ксилол II, абсолютный спирт 96% спирт, 70% спирт и стаканчик для воды. Если в дальнейшем используется спиртовой краситель, то срезы в него переносятся прямо из спирта, минуя воду. Если материал был фиксирован сулемовым фиксатором (жидкость Ценкера), то в батарею нужно включить для удаления сулемы бюксы с йодистым спиртом и тиосульфатом натрия. Йодистый спирт готовят, добавляя к 70% спирту несколько миллилитров раствора йод-йодида калия. Для приготовления основного раствора йод-йодида калия в 10 мл дистиллированной воды растворяют 3 г йодида калия, в 90 мл абсолютного спирта растворяют 2 г йода и затем смешивают оба раствора. Тиосульфат натрия готовят в виде 0.25% раствора. Предметные стекла складывают попарно так, чтобы срезы были обращены к поверхности, и помещают в стаканчик или бюкс под углом друг к другу. Для одновременной обработки большего количества срезов используются стеклянные кюветы, в которых можно разместить сразу 10-20 стекол.

При депарафинировании срезы держат в ксилоле I и II, а также в спиртах по 2-3 мин, в йодистом спирте и тиосульфате натрия 10 мин. Далее следует промывка в дистиллированной воде (после тиосульфата натрия- в нескольких порциях воды).

Дата добавления: 2015-04-30