Приготовление гистологического препарата

По характеру взятого материала различают следующие виды гистологических препаратов:

1. Срезы органов (толщиной 5-15 нм) — используются чаще всего.

2. Мазки (крови, костного мозга и т. д.) и отпечатки (селезенки)

3. Пленки (брюшины, мягкой мозговой оболочки), или тотальные препараты

Приготовление препарата обычно включает четыре этапа:

1. Взятие и фиксация препарата

2. Обезвоживание и уплотнение материала

3. Приготовление срезов

4. Окрашивание препаратов и заключение в консервирующую среду

Взятие и фиксация материала:

Из соответствующего органа вырезают небольшие кусочки (0,5 х 1 х 1 см) и погружают их в фиксатор (формалин, метанол и т. д.) обычно на 24 часа. Фиксация производится для предупреждения процессов аутолиза (самопереваривания тканей). Это достигается путем денатурации (коагуляции) белков. После фиксации образцы промывают проточной водой в течение нескольких часов.

Обезвоживание и уплотнение материала:

Материал уплотняют для того, чтобы в последующем их можно было резать на микротоме. Часто в качестве уплотнителя используют парафин или целлоидин. Образцы предварительно обезвоживают — иначе гидрофобный уплотнитель не сможет проникнуть в ткань. Для этого их «проводят» по батарее спиртов — 70%, 80%, 96% и 100% этанол, по 24 часа в каждом. Т.к. Парафин не растворим и в этаноле, образцы выдерживают потом в смеси этанол-ксилол и в чистом ксилоле. Заливка: образцы помещают в смесь ксилола и парафина, затем в жидкий парафин на 1-2 часа при температуре 52-56 градусов Цельсия. Парафину дают остыть и затвердеть, вырезают из него блок с заключенным образцом и закрепляют на деревянной основе.

Приготовление срезов:

Основу вставляют в специальный прибор — микротом, служащий для приготовления срезов. С помощью микрометрической механической системы объектодержатель вместе с кубиком перемещается за каждый шаг на определенное расстояние (например, 10 мкм). Микротомный нож, направляемый под углом к поверхности парафинового блока, срезает с него тонкий слой органа (срез) заданной толщины. Срезы помещают на поверхность теплой воды для их расплавления, а затем — на предметное стекло.

Окрашивание препаратов и заключение в консервирующую среду:

Перед окрашиванием образцы освобождают от парафина, проводя по батарее растворителей: ксилол, спирт 100%, 96%, 80%, 70%, 60%, вода (по 2-5 минут). Этот ряд завершается водой в том случае, если затем используется водорастворимый краситель. Для окрашивания предметные стекла со срезами помещают на короткое время в раствор красителя, промывают водой, обрабатывают раствором другого красителя (если необходимо) и снова промывают водой. Препарат снова обезвоживают и просветляют (в карбол-ксилоле и ксилоле) для удаления лишней краски. Наконец, на препарат наносят каплю канадского бальзама (для срезов) или кедрового масла (для мазка) и накрывают покровным стеклом.

Дата добавления: 2015-04-30