Окрашивание соединительной и мышечной тканей по методу Ван Гизона

Метод окраски срезов по Шиффу на нейтральные гликопротеиды

Применяется для выявления слизистого секрета в бокаловидных клетках тонкой и толстой кишки. Изготовленные и обработанные срезы погружаются на 7 минут в 1% раствор перйодата калия. После этого промываются в дистиллированной воде 10 минут и инкубируются в реактиве Шиффа 25 минут в темноте. Затем отмываются в трех порциях сернистой воды, проточной и дистиллированной воде. После этого ядра клеток докрашиваются гематоксилином Майера 7 минут и заключаются под покровные стекла. При микроскопии слизистый секрет, содержащий нейтральные гликопротеиды, окрашивается в фиолетово-красный, а ядра клеток — в синий цвет.

Используется для получения обзорных препаратов. Имеет преимущества по сравнению с окраской гематоксилин-эозином, так как по разному окрашивает различные ткани. Соединительную ткань — в ярко-красный цвет, а все остальные ткани — в буровато-желтый или желто-зеленый. Этот метод позволяет отдифференцировать гладкомышечные клетки от соединительнотканных в тех случаях, когда их невозможно различить на препаратах, окрашенных другими методами. В качестве красителя ядер применяется железный гематоксилин Вейгерта, дающий черную или буро-черную окраску ядер. Его готовят непосредственно перед окрашиванием, смешивая равные объемы основных растворов Вейгерта (первого и второго), которые хранят отдельно.

Первый раствор Вейгерта: в 100 мл 96% спирта растворяют 1г гематоксилина.

Второй раствор Вейгерта: 4 мл 29% раствора хлорида железа (3+ или 2-3% раствора железоаммониевых квасцов) сливают с 1 мл крепкой хлористоводородной кислоты и добавляют 95 мл дистиллированной воды.

При смешивании растворов второй раствор приливают к первому в несколько меньшем количестве, а затем добавляют по каплям из пипетки до равного количества. Краситель, если он правильно приготовлен имеет темно-фиолетовый цвет. Если цвет получился бурым, то имеется избыток второго раствора. Таким красителем ядра будут окрашиваться не в черный, а в бурый цвет.

Раствор пикрофуксина: к 100 мл насыщенного водного раствора пикриновой кислоты, прибавляют 5-10 мл 1% водного раствора кислого фуксина.

1. Из дистиллированной воды срезы в гематоксилин Вейгерта на 2-5. Окраску ядер контролировать под микроскопом.

2. Ополоснуть срезы в дистиллированной воде и перенести в водопроводную воду на 10 минут.

3. Поместить срезы на 1-3 минуты в пирофуксин

4. Быстро (5-10 сек) сполоснуть срезы в дистиллированной воде, провести через 96% спирт, просветлить в калорбол-тулуоле, толуоле и заключить.

Коллагеновые волокна красятся в ярко-красный цвет, а мышечные и эластические — в буровато-желтый или желто-зеленый. Ядра буро-коричневого или буро-черного цвета. Недостатком этого метода является выцветание препарата, поэтому их нельзя хранить длительное время.

Дата добавления: 2015-04-30