Дослід 2. Кількісне визначення адреналіну (за Фоліним)

Дослід 1. Якісне визначення 17-кетостероїдів в сечі.

Практична робота

17-кетостероїдами називають всі стероїди, які мають кетонну групу біля 17-го вуглецевого атома, такі як андростерон. Вони утворюються із стероїдів, які мають ОН-групу в 17-му положенні (кортизол, кортизон та ін.).

Принцип методу. Метод базується на реакції 17-кетостероїдів з m-динітробензолом у лужному середовищі з утворенням продуктів конденсації фіолетово-рожевого кольору (максимум поглинання в межах 530 нм). Інтенсивність забарвлення пропорційна кількості 17-кетостероїдів у сечі.

Матеріальне забезпечення: 30 % розчин їдкого натру, розчин м-динітробензолу, сеча.

Хід роботи: В пробірку наливають 5 крапель сечі, 5 крапель 30 % розчину їдкого натрію, 5 крапель розчину м-динітробензолу і перемішують. Через 2 – 3 хв з’являється вишнево-червоне забарвлення, характерне для 17-кетостероїдів.

Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. Максимальна екскреція 17-кетостероїдів у чоловіків та жінок спостерігається в 25-річному віці, після чого починається поступове її зниження.

При стресових станах кількість 17-кортикостероїдів в крові і сечі збільшується. При патології вміст в крові 17-кетостероїдів змінюється в залежності від гіпо- чи гіперфункції наднирників. При хворобі Аддісона (гіпофункції) екскреція 17-кетостероїдів низька (1/3 – 1/5 норми), їх вміст зменшується при гіпертиреозі, важких формах хвороб печінки (цироз), пухлинах наднирників (синдром Іценко-Кушінга).

Паралельне визначення вільних 17-кетостероїдів у сечі дає можливість більш повно оцінити функціональний стан кори наднирників.

Принцип методу. Метод ґрунтується на колориметричному визначенні інтенсивності забарвлення, яке утворюється при взаємодії адреналіну з реактивом Фоліна.

Матеріальне забезпечення: Досліджуваний розчин адреналіну, 10 % розчин вуглекислого натрію, реактив Фоліна, стандартний розчин адреналіну.

Хід роботи: В суху побірку вносять 1 мл досліджуваного розчину адреналіну і до нього додають 4 мл 10 % р-ну NaHCO₃ і 0,5 мл реактиву Фоліна. Вміст пробірки струшують. Через 5 хв інтенсивність отриманого синього зхабарвлення вимірюють на калориметрі з червоним світофільтром проти контрольної проби, яка містить замість розчину адреналіну 1 мл дистильованої води, 4 мл 10 % NaHCO₃ і 0,5 мл реактиву Фоліна. Знаючи оптичну густину досліджуваного розчину за калібрувальним графіком знаходимо концентрацію адреналіну в грамах на літр.

Побудова калібрувального графіку. В мірну колбу об’ємом 25 мл додають 1 мл адреналіну і доводять до мітки водою. 1 мл такого розчину містить 0,04 мг адреналіну. Основний розчин розводять в 2 і 4 рази та отримують відповідно розчини з концентрацією адреналіну 0,02 і 0,01 г/л. В три пробірки додають по 1 мл розчину адреналіну (0,01, 0,02 і 0,04 г/л), а в четверту пробірку – 1 мл дист. води і виконують хід роботи. Отримавши відповідні оптичні густини кожної концентрації, будують калібрувальний графік. На осі абсцис відкладають значення концентрацій стандартних розчинів адреналіну, на осі ординат – оптичні густини відповідні цим концентраціям.

Оптична густина

розчину, А 1,5

1,0

0,5

0,01 0,02 0,03 0,04 конц. г/л

Крива залежності оптичної густини розчину адреналіну від його концентрації

Зробити висновок.

Клініко-діагностичне значення. Максимальна екскреція 17-кетостероїдів у чоловіків та жінок спостерігається в 25-річному віці, після чого починається поступове їх зниження.

При стресових станах кількість 17-кортикостероїдів в крові і сечі збільшується. При патології вміст в крові 17-кетостероїдів змінюється в залежності від гіпо- чи гіперфункції наднирників. При хворобі Аддісона (гіпофункції) екскреція 17-кетостероїдів низька (1/3 – 1/5 норми), їх вміст зменшується при гіпертиреозі, важких формах хвороб печінки (цироз), пухлинах наднирників (синдром Іценко-Кушінга).

Паралельне визначення вільних 17-кетостероїдів у сечі дає можливість більш повно оцінити функціональний стан кори наднирників.

Тестостерон – найбільш активний андроген утворюється в організмі людини. Визначення його дозволяє судити про функцію статевих залоз. Добова екскреція тестостерону в чоловіків 20-40 років становить в середньому 70 мкг/добу, а у жінок того ж віку 8 мкг/добу.

При захворюваннях нирок з розвитком хронічної ниркової недостатності концентрація всіх 17-ОКС в плазмі близька до норми, але вільних 17-ОКС, виділених за добу, значно збільшена.

Дата добавления: 2015-05-24