Колориметричес­ким методом

Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови

В организме человека существуют два типа холинэстераз:

1) ацетилхолинэстераза (АХЭ), которая встречается пре­имущественно в мозге, эритроцитах, мышцах, нервах: это субстратспецифический фермент, катализи­рующий гидролитическое расщепление ацетилхолина на холин и уксусную кислоту;

2) холинэстераза (ХЭ) содержится в основном в печени, поджелудочной железе и плазме крови, она обладает более широкой субстратной специфичностью, т. е. расщепляет ацетилхолин и другие эфиры холина. Активность ацетилхолинэстеразы сыворотки и тка­ней определяют при клинико-диагностических исследо­ваниях.

В норме ХЭ колеблется в широких пределах: 160— 340 мкмоль/(мл×ч). Чаще всего при патологических со­стояниях активность ХЭ снижается. Значительное сни­жение активности ХЭ сыворотки крови отмечается при заболеваниях печени, гипотиреозе, бронхиальной астме, ожогах, отравлениях. Метод основан на количественном определении уксусной кислоты, образующейся из ацетил-холинхлорида в ферментативной реакции, катализируе­мой холинэстеразой сыворотки:

Ход работы. Готовят две пробирки для опытной и контрольной пробы. В опытную пробирку вносят 5 мл раствора вероналового буфера, содержащего индикатор феноловый крас­ный, 0,2 мл дистиллированной воды, 0,1 мл сыворотки крови. Смесь помещают в термостат при 37°С на 5 минут. Затем в пробу добавляют 0,2 мл раствора ацетилхолин хлорида и инкубируют в термостате при 37°С в течение 30 минут. После инкубации в пробу добавляют 0,2 мл раствора прозерина для прекращения ферментативной реак­ции. В контрольную пробу вносят сначала 0,2 мл раство­ра прозерина, а затем все реактивы по порядку, как в опыт­ной пробе.

После инкубации обе пробы колориметрируют на ФЭКе с зеленым светофильтром против воды. Окраска ус­тойчива в течение 1 часа. Находят разность между показате­лями ФЭКа для опытной и контрольной проб, затем по калибровочному графику определяют количество уксус­ной кислоты, образовавшейся в опыте.

Расчет активности холинэстеразы делают по форму­ле: активность холинэстеразы = а × 10 × 2 мкмоль/(мл × ч), где а — содержание уксусной кислоты в пробе, мкмоль; 10 — коэффициент пересчета на 1 мл сыворотки; 2 — коэффи­циент пересчета на 1 ч инкубации.

Контрольные вопросы

1. Какие вещества способны проникать через гематоэнцефалический барьер? Их структурные формулы.

2. Напишите структурные формулы липидов, входящих в состав нервной ткани: цереброзидов, ганглиозидов, сфингомиелинов, фосфолипидов, ХС.

3. Какие пептиды участвуют в метаболизме нервной ткани? Состав их.

4. Напишите схему образования аммиака в нервной клетке («пуриновый» цикл). Укажите соответствую­щие ферменты.

5. Какие аминокислоты принимают участие в обмене в клетках нервной системы? Напишите схему, подтвер­ждающую обмен этих аминокислот.

6. Укажите биохимические основы возникновения: а) миастении;

б) шизофрении; в) депрессивных состо­яний.

7. Каков принцип определения каталитической актив­ности холинэстеразы в сыворотке крови?

Литература

1. Пустовалова Л.М. Практикум по биохимии. Ростов-на-Дону «Еникс», 1999.

2. Николаев А.Я. Биологическая химия. Москва, МИА, 2001.

3. Биохимия. Под ред. Е.С. Северина, М., «ГЭОТАР –Медиа», 2008.

4. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическя химия. М. «Медицина», 1998. Стр. 625, 644.

БИОХИМИЯ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ

Мышцы составляют более 40% массы тела. Вся деятельность организма связана в той или иной мере с работой мышц. Функция сосудов и сердца, дыхание, пищеварение, выполнение работы обусловлено деятельностью мышечной ткани. Биохимия мышц служит основой для понимания многообразных функций мышечной ткани и играет большую роль в развитии знаний по физиологии, гигиене, понимании патогенеза заболеваний, связанных с поражением мышечной ткани (инфаркт миокарда, миодистрофии, коллагеновые болезни). В биоэнергетике мышечной ткани большое значение играет метаболизм адениловых и гуаниловых нуклеотидов, содержимое которых изменяется при патологических состояниях.

Цель: изучить молекулярную организацию мышечного волокна, дать представление о метаболических процессах, обеспечивающие мышцы энергией.

Дата добавления: 2015-07-02