Лабораторная работа. Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию

Вопросы для самостоятельной подготовки к занятию

Занятие № 1

1. Тема: Переваривание углеводов. Обмен гликогена.

2. Форма учебного процесса: Лабораторно-практическое занятие.

3. Актуальность: Углеводы играют важную роль в жизнедеятельности организма, так как входят в состав структурных элементов клеток всех органов и тканей, явля­ются важным источником энергии. Студенты должны хорошо изучить данный раздел, по­скольку с нарушениями обмена углеводов связаны такие заболевания как дисахаридозы, гликогенозы, агликогенозы и другие.

4. Цель общая:

4.1.1. Изучить переваривание углеводов и пути использования продуктов, роль печени в обмене углеводов, биохимические основы патологии процессов обмена углеводов.

4.1.2. Научиться определять активность амилазы в крови, слюне и моче, оценивать полученные результаты.

4.2. Конкретные цели:

Знать:

1. Определение и классификация углеводов.

2. Строение моносахаридов, дисахаридов и полисахаридов.

3. Функции углеводов.

4. Переваривание углеводов пищи.

5. Роль печени в обмене углеводов.

6. Обмен гликогена. Регуляция обмена гликогена.

7. Патология обмена углеводов.

Уметь:

1. Использовать знание данной темы для решения ситуационных задач.

2. Научиться определять активность амилазы в крови, моче и слюне.

3. Интерпретировать полученные в ходе лабораторных исследований

результаты в соответствии с диагностическим значением.

Исходный уровень знаний:

1. Определение и классификация углеводов.

2. Строение моносахаридов, дисахаридов, крахмала и гликогена.

3. Представление о первом этапе катаболизма углеводов.

4. Понятие о киназах, лиазах и гидролазах.

По новой теме:

1. Переваривание и всасывание углеводов.

2. Нарушение переваривания и всасывания углеводов.

3. Роль печени в обмене углеводов.

4. Унификация углеводов.

5. Синтез и распад гликогена, регуляция процессов.

6. Нарушение обмена гликогена.

Рекомендуемая литература

1. Конспект лекций.

2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф., "Биологическая химия", 1990, стр. 238-266.

3. Николаев А.Я., " Биологическая химия", 1989, стр. 232-255.

Учебно-исследовательская работа студентов на занятии

1. Проделать лабораторную работу “Определение активности амилазы в крови, слюне и моче”.

2. Сделать выводы по результатам проведенных биохимических анализов.

2. Подготовиться к защите лабораторной работы (ориентировочные задачи и вопросы приведены ниже).

1. Определение активности a-амилазы в крови

Оборудование:	1.	Штатив с пробирками.
	2.	Мерная коническая пробирка.
	3.	Пипетки на 1 мл и 0,1 мл.
	4.	Термостат.
	5.	КФК.
Реактивы:	1.	Крахмальный субстрат.
	2.	Раствор йода.
	3.	Дистиллированная вода
	4.	Сыворотка крови, моча, слюна.

Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении уменьшения концентрации крахмала в пробах после ферментативного гидролиза по сравнению с исходным уровнем, что служит мерой активности амилазы.

Ход работы. В 2 пробирки (опытная и контрольная пробы) наливают по 0,5 мл крахмального субстрата. Опытную пробу прогревают при 37^ОС 5 мин, после чего добавляют в нее 0,01мл сыворотки и инкубируют 8 мин при 37^ОС в термостате. Сразу же после инкубации опытной пробы в обе пробирки добавляют по 0,5 мл раствора йода и доводят объем проб до 5 мл дистиллированной водой. Сразу же колориметрируют их при красном светофильтре в кюветах толщиной 1 см против воды.

Активность a-амилазы рассчитывают по формуле:

(Е_К – Е_ОП)/Е_К х 150 = г крахмала, гидролизованного 1л сыворотки за 1 час инкубации (г/л), где

Е_К – оптическая плотность контрольной пробы,

Е_ОП – оптическая плотность опытной пробы,

150 – коэффициент пересчета на количество крахмала в г, гидролизованного 1 л сыворотки за 1 час инкубации.

Норма активности амилазы в сыворотке – 16-30 г/л в час

2. Определение активности a- амилазы в моче

Работу проводят так же, как с сывороткой крови, только в опытную пробу вместо сыворотки добавляют 0,01 мл мочи, разведенной в 100 раз. При расчете активности фермента в формулу добавляют коэффициент, учитывающий разведение мочи.

Норма активности амилазы в моче – 28-160 г/л в час

3. Определение активности a-амилазы в слюне

Работа проводится так же, как с сывороткой и мочой. В опытную пробу добавляют 0,01 мл разведенной в 10 раз слюны. При расчете учитывают коэффициент разведения.

Норма активности амилазы в слюне – 320-640 г/л в час.

Диагностическое значение определения амилазы

Гиперамилаземия. При остром панкреатите активность амилазы крови возрастает в первые 12 – 24 часа в 10-40 раз, затем быстро снижается и приходит к норме на 2-6 сутки.

При остром аппендиците, перитоните, перфоративной язве желудка и двенадцатиперстной кишки активность амилазы повышается в 3-5 раз.

Гиперамилаземия наблюдается также при паротите.

Гиперамилаземию вызывают: адреналин, гистамин, секретин, фуросемид, салицилаты, антикоагулянты, морфин, пантопон, опий, кодеин, тетрациклин, алкоголь.

Гипоамилаземия. Чаще всего снижение активности амилазы свидетельствует о недостаточности экзокринной функции поджелудочной железы. Также встречается у больных гепатитами, циррозами, злокачественными опухолями с метастазами в печень, обширными ожогами кожи, сахарным диабетом, гипотиреозом, при интоксикациях.

Гиперамилазурия. При остром панкреатите в суточной моче активность амилазы возрастает в 10-40 раз. При этом активность амилазы остается высокой до 7 суток.

Отношение активности амилазы в крови к активности амилазы в моче служит показателем функциональной полноценности почечного фильтра.

Проверка качества усвоения знаний (конечный уровень)

а) Вопросы для защиты лабораторной работы

1. К какому классу ферментов относится амилаза?

2. Назовите субстраты для амилазы.

3. Где образуется амилаза и где действует?

4. Назовите продукты амилазной реакции.

5. Какой принцип лежит в основе метода определения активности амилазы?

6. С какой целью пробы помещают в термостат?

7. Для диагностики каких заболеваний используется определение активности амилазы в крови? моче? слюне?

8. Каковы причины снижения активности амилазы в крови?

9. Каковы причины увеличения активности амилазы в крови?

10. Каковы причины повышения активности амилазы в моче?

11. Чему равна норма активности амилазы в крови? В слюне? В моче?

б) Ситуационные задачи (УИРС)

1. Животному внутривенно ввели стерильный раствор сахарозы. Появится ли сахароза в моче?

2. Употребление в пищу кондитерских изделий, конфет вызывает у ребенка рвоту, понос. Он плохо переносит и сладкий чай, тогда как молоко не вызывает отрицательных реакций. Какой молекулярный дефект является причиной данных нарушений?

3. Больной страдает от судорог в мышцах при напряженной физической работе, но в остальном чувствует себя здоровым. Биопсия мышечной ткани выявила, что концентрация гликогена в мышцах этого больного гораздо выше нормы. Почему накапливается гликоген? Ваши рекомендации такому человеку.

4. Клинические симптомы двух форм галактоземии, одна из которых обусловлена недостаточностью галактокиназы, а другая - галактозо-1-фосфат-уридилтрансферазы, резко различаются по своей тяжести. И в том, и в другом случае молоко вызывает у больных кишечные расстройства, но при недостаточности галактозо-1-фосфат-уридилтрансферазы нарушаются функции печени, почек, селезенки и мозга, а затем наступает смерть. Какие продукты накапливаются в крови и тканях при недостаточности каждого из двух ферментов? Оцените сравнительную токсичность этих продуктов на основе приведенных выше данных.

5. Сделайте предположение о возможных причинах заболевания, если известно, что у больного, длительно страдающего хроническим заболева-нием кишечника – энтероколитом, после молочной пищи стали появляться метеоризм, диарея, колики.

6. Введение животным адреналина вызывает гипергликемию. Почему это не наблюдается у животных с удаленной печенью?

7. Какие реакции характерны для мобилизации гликогена в печени и мышцах?

1) гликоген → глюкозо-1-фосфат→ глюкозо-6-фосфат→ глюкоза

2) гликоген→ глюкозо-1-фосфат→ глюкозо-6-фосфат

3) гликоген → глюкозо-6-фосфат → лактат

4) гликоген → мальтоза

А. Характерно для печени.

Б. Характерно для мышц.

С. Протекает и в печени, и в мышцах.

Д. Не протекает ни в печени, ни в мышцах.

Дата добавления: 2015-07-13