Проведение исследований

Тема 7. ФЕНОМЕН РОЗЕТКООБРАЗОВАНИЯ В ИММУНОЛОГИИ

Метод розеткообразования одним из первых получил распро­странение в иммунологии, однако и сегодня он не потерял своей зна­чимости для количественной оценки субпопуляций лимфоцитов. Не­сомненно, метод розеткообразования по своей точности уступает многим модификациям методов на основе моноклональных антител, но для основных целей практической иммунологии точность резуль­татов количественной оценки субпопуляций лимфоцитов, получае­мых с его помощью, достаточна. Простота постановки теста и низкая стоимость реактивов делают данный метод достаточно привлекатель­ным для большого числа научно-исследовательских лабораторий.

Методы розеткообразования основаны на взаимодействии мем­бранных рецепторов лимфоцитов с эритроцитами, что визуально оп­ределяется при микроскопировании в виде розеток - образований, со­стоящих из лимфоцитов, к поверхности которых присоединены эрит­роциты.

На поверхности лимфоцитов имеется целый ряд структур (марке­ров), позволяющих идентифицировать Т-лимфоциты (тимусзависи-мые) и В-лимфоциты (тимуснезависимые).

Применение эритроцитарных маркеров позволяет с помощью различных вариантов реакции розеткообразования, проводимых од­новременно, определять численность и соотношение функционально активных, свободных клеток иммунной системы организма и судить об его иммунокомпетентности. Т-лимфоциты определяют с помощью реакции спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана или коз; В-лимфоциты — с помощью реакции комплементарного розетко­образования с эритроцитами быка, образовавшими иммунные ком­плексы с гетерофильными антителами и комплементом; большую часть лимфоцитов-киллеров - с помощью реакции непрямого глобулинового розеткообразования с эритроцитами быка, образовавшими иммунные комплексы лишь с гетерофильными антителами. Антиген-реактивные лимфоциты определяют с помощью реакции антигенсвязывающего розеткообразования с эритроцитами быка, адсорбиро­вавшими антигены возбудителя заболевания (ППД-туберкулин, антиген-бруцелл).

Для качественного проведения всего комплекса исследований необходимо иметь по 1,5-2,0 мл крови исследуемых животных, хра­нящейся не более суток при температуре 4-10°С и стабилизированной антикоагулянтом. Для стабилизации крови крупного рогато­го скота лучше использовать приготовленный на физиологическом растворе 2,7%-ный раствор трилона Б рН 7,0-7,4 в соотношении 0,1 на 1,0 мл крови.

Для определения численности популяций лимфоцитов крови ис­следуемых животных необходимо проводить гематологические ис­следования. Абсолютное количество лейкоцитов крови удобнее опре­делять в жидкости Тюрка (к 100 мл 3%-ного раствора ледяной уксус­ной кислоты добавляют 1 мл 1%-ного раствора метиленовой сини) при помощи камеры Горяева, а относительное - с помощью светового микроскопа в мазках крови, окрашенных по Романовскому.

Дата добавления: 2015-07-13