Гена захоплення

Enhancer захоплення

Тип інсерційного мутагенезу

Використовується для пошуку генів з цікавими патерни експресії

Вставка несе в собі ген-репортер

Висловлює чужорідного білка

Не впливає на організм

Enhancer пастку

З мінімальним промотором перед ген-репортер

Enhancer поблизу точки введення діє на нього

Enhancer захоплення іншого типу інсерційного мутагенезу, який спрямований на виявлення генів з цікавими патерни експресії. Вставка несе в собі ген-репортер, такі як бета-галактозидази, чужорідні білки, експресія яких не має ніякого ефекту на організм. Підсилювач-пастка вектор також має мінімальний промотор, який не активує експресію гена саме по собі, але дозволить активації, коли підсилювач знаходиться поблизу.

28. Enhancer захоплення у дрозофіли

Використовуйте транспозона P елемент

Здійснює ген-репортер

б-галактозидаза

Хміль у геном

Коли землі біля підсилювача, активізує експресію генів

Вираз схожий на сусідній ген

Enhancer захоплення широко використовувався в плодової мухи, дрозофіли. Підсилювач-пастки конструкції здійснюється на транспозона елемент P. Ген-репортер у цьому випадку бета-галактозидази. Транспозона хмелю випадково в лету геному. Коли він приземляється поруч з підсилювачем, експресія бета-галактозидази активується, що підсилювач. Це призводить до експресії бета-галактозидази в шаблон, який повинен бути схожий на геном, який зазвичай керує підсилювачем.

29. Enhancer захоплення у дрозофіли II

Ген-репортер: зелений флуоресцентний білок (GFP)

Пастка підсилювач вставив в геном виражені в частині льоту очей

На цьому слайді показаний приклад підсилювач захоплення у дрозофіли, в якому репортер ген зеленого флуоресцентного білка (GFP). Щоб визначити тканеспеціфіческіе патерни експресії, мухи були виявлені під мікроскопом з підсвічуванням, яка викликає GFP виділяти характерне зелене свічення. У цьому випадку зображення оптичного накладення світла, що йде від декількох окремих очима, або омматідіев, які складають око з'єднання льоту. Вона ілюструє форму трапеції з шести зовнішньої фоторецепторів формування єдиного ommatidium, в той час як внутрішні клітини фоторецепторів в середині не відзначається.

Подібний захоплення підсилювач

Замість того, щоб мінімальний промотор має з'єднання акцепторного сайту, перш ніж ген-репортер

Висловив тільки тоді, коли правильно зрощування

Зазвичай причиною генних порушень, а також

Гена захоплення схожа на захоплення підсилювач винятком того, що не існує мінімального промотору гена захоплення. Замість цього, конструкція має сайт сплайсингу акцептора в передній частині гена-репортера. У цьому випадку, єдиний раз, коли репортер конструкція повинна бути виражена, коли конструкція вставляється в екзонів або інтрон гена. Після сплайсингу відбувається, гібридний білок буде вироблятися. Цей тип вставки зазвичай викликає ген бути порушена, в результаті чого втратою функцію мутантного фенотипу. Зображення на цьому слайді зображено мозок миші проведення генної пастки вставлений в гніздо Ptprk. Фарбування показує, що вираз зосереджена в корі головного мозку (вгорі) і в певних нейронах (внизу).

31. Основи зворотної генетики
Зворотної генетики починається з відомими генами

Наприклад, з геномних послідовностей

Мета: визначити функції за допомогою цілеспрямованої модуляції активності генів

зниження

підвищення

Зворотної генетики починається з пізнання послідовності гена і має на меті визначити функції гена. Це може бути зроблено шляхом модуляції активності генів: або зменшити його, щоб зробити втратою функції мутації або збільшити його, щоб зробити надлишкової функцією мутації.

32. Способи модулювати активність генів

видалення гена

гомологічною рекомбінації

Працює також у дріжджах

Може бути зроблено в мишу і летить

Втручатися з транскрипцією

антисмислової РНК

Інтерферуючих РНК (РНК-інтерференції)

Визначення гена, постраждалих від мутагенезу

Інсерційного або хімічні

Існують різні способи, які були розроблені, щоб модулювати активність генів. Найбільш драматичним способом зниження активності гена є усунення його повністю, видаливши ген з генома. Це може бути зроблено шляхом гомологічної рекомбінації. Цей підхід працює легко, в дріжджах, в той час як у мишей і мух це можливо, але досить багато часу. В інших організмів модель, частота, з якою гомологічною рекомбінації відбувається настільки мала, що вона не є життєздатним підходом до зниження функції гена. В якості альтернативи можна заважати транскрипції за допомогою антисмислової РНК або інтерферуючих РНК (РНК-інтерференції). Третій підхід для скринінгу бібліотеки осіб, які були мутагенезу зі вставками або хімічних речовин і виявлення мутантних гена інтересу.

Дата добавления: 2014-01-05