Зворотний приклад генетика

Ген, який кодує м'язи специфічний фактор транскрипції в миша

Міогенін

Гомологічною рекомбінації використовуються для видалення гена

Миші народився, але не може зробити м'язи

Гомологічною рекомбінації була використана для визначення ролі генів, які експресуються в розвиваються м'язові клітини. Міогенін ген був ідентифікований як транскрипційні фактор, який зміг перетворити nonmuscle клітин в м'язові клітини. Тим не менш, його роль в природних умовах не було відомо, поки вона була частково вилучена у мишей. Миші, які були гомозиготні по видаленню не зробити нормальний м'язів, тому що клітини-попередники не були здатні диференціюватися в м'язах.

34. RNAi і антисмислової РНК

Дволанцюжкової РНК в змозі порушити експресію генів

Клітини мають машини, які руйнують дволанцюжкової РНК

По-видимому, основою для наступних цілей:

Інтерферуючих РНК (РНК-інтерференції)

Дволанцюжкової РНК вводили в клітини

антисмислової РНК

Уявіть комплементарної РНК

Форми дволанцюжкової РНК в клітинах

Експресії РНК може бути порушена в процесі залежить від дволанцюжкової РНК. Коли дволанцюжкової РНК перебуває в клітці, РНК руйнується. Здатність клітин до розпізнавати і знищувати дволанцюжкової РНК мабуть, основою, на якій інтерферуючих РНК (РНК-інтерференції) і антисмислової РНК порушити експресію генів. У разі РНК-інтерференції, дволанцюжкової РНК вводять в клітини, в той час як для антисмислової РНК, додаткові молекули РНК зроблений, який утворює дволанцюжкові молекули РНК в клітині. В обох випадках, зазвичай результатом є зниження достатку РНК-мішені, але не повної ліквідації.

35. Механізм РНК-інтерференції I

RNAi ймовірно, залежить від системи, що використовується для визначення наступного:

Дволанцюжкові (DS) РНК-вірусів

Інші ненормальні експресії генів

Спочатку характеризується наступним:

гриб

Придушення в Neurospora

рослини

Опір поширенню вірусу

Існує все більше свідчень про те, що РНК-інтерференції залежить від системи, яку організм використовує для виявлення дволанцюжкової РНК-вірусів, а також інші порушення експресії генів. Цей механізм був спочатку відрізняється тим, гриб Neurospora, де явище відоме як придушення, так і в рослинах, де він відповідає за стійкість до розповсюдження вірусу.

36. Механізм РНК-інтерференції II

Стільниковий РНКази визнає дцРНК

Пристане до невеликим (23 б.п.) фрагментів

Фрагменти стенограми гибрідизуючою

РНК-залежна РНК-полімераза утворює дцРНК

RISC нуклеази жує дцРНК

Нинішній зору механізму є те, що стільникові РНКази конкретно визнається дцРНК і розщеплює її на дрібні (23 б.п.) фрагментів. Ці фрагменти потім дисоціюють і reanneal до додаткових РНК-транскриптів. РНК-залежна РНК-полімераза використовується відпалений фрагментів прем'єр виробництва дволанцюжкової РНК. Дволанцюжкової РНК визнається комплекс білків, відомих як RISC, який розщеплює її на дрібні шматочки.

37. Систематичне екранів RNAi

Замочіть в рішенні дцРНК

Потік бактерій, висловивши дцРНК

Або вводять дцРНК

Робить систематичне екранів RNAi можливо

~ 75% часу, RNAi дає зниження рівня РНК

Були використані для зниження експресії генів

Зокрема хромосом, або

Виражені в певному часі розвитку

Для аскариди, C. Елеганс, представляючи RNAi в організм виявляється дивно легко зробити. Хробаки можуть бути або просочені розчином дцРНК, годували на бактерії, які виражають дцРНК, або вводять з дцРНК. Ці технології зробили можливою широкомасштабної систематичної зворотного генетичних екранів за допомогою РНК-інтерференції. На сьогоднішній день RNAi були використані для зниження експресії кожного гена на певній хромосомі або кожен ген, який виражається в певному органі. Тим не менш, RNAi не завжди призводить до зниження експресії генів. Сучасні підходи з'являється на роботі близько 75% часу.

38. RNAi на всіх генів у хромосомі

Мета: В C. Елеганс, визначити функції усіх генів 2300 на хромосомі III

RNAi будує зроблені для кожного гена

Хробаки мікроін'єкції з дволанцюжкової РНК

Група на чолі з д-ром А. Хайман використовував RNAi проаналізувати функції всіх генів у хромосомі III С. Елеганс. Конструкції, які будуть виробляти дцРНК були зроблені для кожного гена на хромосомі III, заснований на повній послідовності генома. Хробаки були мікроін'єкції з дволанцюжкової РНК, що відповідають кожному з 2300 ORFs на хромосомі. Хробаки були потім спостерігали за фенотипу в результаті інтерференції РНК-інтерференції з експресією генів

Дата добавления: 2014-01-05