Студопедия

КАТЕГОРИИ:


Архитектура-(3434)Астрономия-(809)Биология-(7483)Биотехнологии-(1457)Военное дело-(14632)Высокие технологии-(1363)География-(913)Геология-(1438)Государство-(451)Демография-(1065)Дом-(47672)Журналистика и СМИ-(912)Изобретательство-(14524)Иностранные языки-(4268)Информатика-(17799)Искусство-(1338)История-(13644)Компьютеры-(11121)Косметика-(55)Кулинария-(373)Культура-(8427)Лингвистика-(374)Литература-(1642)Маркетинг-(23702)Математика-(16968)Машиностроение-(1700)Медицина-(12668)Менеджмент-(24684)Механика-(15423)Науковедение-(506)Образование-(11852)Охрана труда-(3308)Педагогика-(5571)Полиграфия-(1312)Политика-(7869)Право-(5454)Приборостроение-(1369)Программирование-(2801)Производство-(97182)Промышленность-(8706)Психология-(18388)Религия-(3217)Связь-(10668)Сельское хозяйство-(299)Социология-(6455)Спорт-(42831)Строительство-(4793)Торговля-(5050)Транспорт-(2929)Туризм-(1568)Физика-(3942)Философия-(17015)Финансы-(26596)Химия-(22929)Экология-(12095)Экономика-(9961)Электроника-(8441)Электротехника-(4623)Энергетика-(12629)Юриспруденция-(1492)Ядерная техника-(1748)

Профилактика и терапия инфекционных заболеваний 2 страница




Благодаря такому подходу, со второй половины 20-го века по нынешние времена человечество, даже при чрезвычайных ситуациях политического (локальные войны) или природного (стихийные бедствия) характера, не допускало возникновения эпидемий целого ряда инфекционных заболеваний, против которых не удается создать массовый искусственный активный иммунитет.

Огромную роль в ограничении заболеваемости инфекционными болезнями играет постоянно осуществляемый контроль за состоянием окружающей людей среды с точки зрения ее потенциальной опасности как источника болезнетворных микроорганизмов. Методология и принципы такого контроля, называемого также санитарно-эпидемиологический надзором, разработаны специализированной частью медицинской микробиологии – санитарной микробиологией, рассматриваемой в наше время в качестве отдельной научно-практической дисциплины.

Санитарная микробиология – это медико-биологическая наука, исследующая закономерности существования потенциально опасных для человека микроорганизмов в окружающей среде и обуславливаемые ими процессы, которые могут оказать вредное влияние на здоровье людей. Она неразрывно связана с эпидемиологией и гигиеной, так как целью проводимых в рамках этой науки исследований является изучение путей попадания болезнетворных микроорганизмов в окружающую человека среду, условий и особенностей их выживания вне организма-хозяина и проникновения их в организм человека. Конечными результатами подобных исследований становятся разрабатываемые санитарными микробиологами рекомендации, на которых базируются санитарно-гигиенические требования к объектам окружающей человека среды.

В большинстве стран мира такие требования носят законодательный характер и для их реализации существуют специальные санитарно-эпидемиологические службы. В постсоветских странах, включая Республику Беларусь, они являются самостоятельной частью систем здравоохранения и представляют собой территориально-привязанную сеть учреждений, в обязанность которых входит осуществление постоянного санитарного надзора. Основой такой сети являются лаборатории практического назначения, предназначенные для проведения анализа объектов окружающей среды на предмет их потенциальной опасности для здоровья человека – санитарно-эпидемиологические станции (СЭС). В 90-х годах 20-го века СЭС в Беларуси были переименованы в территориальные (сельские районные, городские районные, городские, областные, республиканский) центры гигиены и эпидемиологии при полном сохранении их основной структуры. В составе таких центров любого уровня обязательным компонентом является бактериологическая лаборатория, позволяющая осуществлять санитарно-микробиологический анализ воды, почвы, воздуха и продуктов питания.

Для оценки санитарно-микробиологического состояния объектов окружающей среды разработаны специальные методы и определенные показатели, основными из которых являются микробное число, титр и индекс.

Микробное число (оно же общее микробное число), сокращенно МЧ (или ОМЧ),отражает количество бактерий в 1 г твердого продукта или почвы, 1 мл исследуемой жидкости и в 1 м3 воздуха, способных образовать колонии на плотной мясо-пептонной среде (МПА) при 37°С в течение 24-48 часов.

Уже из приведенной формулировки видна специфичность и санитарно-эпидемиологическая направленность данного показателя. Он указывает не на реальное количество микроорганизмов в исследуемом объекте, а в основном на число тех бактерий, которые попадают в него из организмов высших животных и человека, так как температура и состав питательной среды обеспечивают именно им оптимальные условия для размножения. При этом следует учесть, что определенная часть сапротрофных обитателей естественных микробоценозов также способных формировать колонии в указанных условиях, поэтому для большинства часто подвергающихся санитарно-бактериологическому анализу объектов установлены нормы их обычной микробной обсемененности, то есть те значения ОМЧ, которые характерны для них постоянно. Обычно число тех или иных бактерий в конкретном микробоценозе регулируется совокупностью имеющихся здесь биотических и абиотических факторов и колеблется незначительно. Превышение этих значений, как правило, указывает на загрязнение объекта выделениями из организма человека или животных, а, значит, и на степень его потенциальной опасности. Логика здесь проста – чем выше данный показатель, тем более вероятно присутствие патогенных и условно-патогенных бактерий, местом постоянного обитания которых являются организмы высших животных.

Для определения микробного числа воды или другой жидкости проводят отбор проб в стерильную посуду с соблюдением рекомендованных правил асептики. Доставленные в лаборатории пробы высевают без разведений и (или) после соответствующих десятикратных разведений в мясо-петонный агар обычно в количестве 1 мл на чашку Петри. Как правило, используется следующий метод посева: в стерильную чашку Петри без среды вносится засеваемый объем, затем добавляется расплавленная и охлажденная до 50-60°С агаризованная среда в количестве 10-15 мл и жидкости быстро перемешиваются до начала застывания среды. После полного застывания агара чашки переносят в термостат с температурой 37°С.

Твердые объекты (почва, ряд пищевых продуктов) анализируются путем предварительного внесения определенных навесок в определенный объем стерильного физиологического раствора (например, 30 г вещества в 270 мл физраствора), механического взбалтывания (желательно до образования однородной суспензии), отстаивания для оседания крупных частиц и далее высева полученной жидкости по описанной выше схеме.

Исходя из сути ОМЧ как показателя понятно, что он по ряду причин не может быть высокоточным. Конечно, идеальными показателями опасности окружающей среды были бы сведения о наличии в ней непосредственных возбудителей инфекционных заболеваний. Однако их прямое обнаружение при широко осуществляемом постоянном санитарно-микробиологическом анализе на протяжении практически всего 20-го века так и оставалось мечтой санитарных микробиологов. Имевшиеся в распоряжении микробиологов методы видовой идентификации бактерий по физиолого-биохимическим и, тем более, определяющим патогенность и вирулентность свойствам в большинстве случаев требуют недель или даже месяцев, в течение которых опасность заражения, если она имеется, успеет реализоваться. Естественно, что для целей профилактики инфекционных болезней, ради которых и проводится собственно санитарно-бактериологический анализ, такой подход являлся неприемлемым. Поэтому, разрабатывая методики санитарного надзора, микробиологи избрали путь косвенного выявления потенциальной опасности, выражающийся, в частности, в определении ОМЧ.

Совершенствуя анализ в рамках этого же пути, санитарные микробиологи подобрали приемлемые по времени выполнения методики, позволяющие отличить бактерии из микробиоты высших животных и человека от постоянных обитателей естественных водоемов и почв. Так сложилось представление о так называемых санитарно-показательных микроорганизмах (сокращенно СПМ или в некоторых изданиях СПМО), широко применяемое в санитарной микробиологии.

Для того, чтобы те или иные микроорганизмы получили статус санитарно-показательных, они должны отвечать следующим критериям:

- быть симбионтами человека и (или) других высших животных, то есть постоянными обитателями поверхностей (преимущественно слизистых оболочек) этих организмов;

- выделяться из мест своего обитания в окружающую среду в ходе естественных процессов (дефекация, дыхание, чихание, кашель);

- существенно не увеличивать свою численность вне организма- хозяина в естественных условиях;

- выживать в окружающей среде не меньшее (а желательно большее) время, чем возбудители инфекционных заболеваний (облигатные патогены)

- иметь четко тестируемые морфологические и физиолого-биохимические свойства, по которым их можно отличить от свободноживущих;

- выявление указанных выше свойств должно осуществляться в наиболее короткие сроки (до 48 часов);

- методы выявления должны быть осуществимы в минимально оборудованных бактериологических лабораториях персоналом со средним специальным медицинским образованием;

- материальные затраты на проведение анализа должны быть по возможности минимальными.

Три последних критерия продиктованы практическими условиями работы санитарно-эпидемиологических служб и фактически определяют возможность признание системами здравоохранения тех или иных стран данных микроорганизмов в качестве санитарно-показательных.

Следует подчеркнуть, что определение принадлежности бактерий к той или иной группе санитарно-показательных микроорганизмов не является видовой идентификацией. Оно должно указывать только на принадлежность к данной группе, а не к конкретному роду или виду. Это отражается и в официально принятых названиях групп санитарно-показательных микроорганизмов.

В качестве примера можно привести одну из наиболее старых, введенных в употребление еще в конце 19-го века, группу санитарно-показательных микроорганизмов с названием Бактерии группы кишечных палочек (сокращенно БГКП). Как известно, одними из постоянных обитателей толстого кишечника высших животных является бактерии из вида Escherichia coli, которые постоянно выделяются из кишечника в процессах дефекации. Это хорошо соответствует первому и второму из приведенных выше критериев. Согласно пятому критерию были выбраны несколько легко тестируемых (и в целом соответствующих всем остальным критериям) признаков: палочкообразная форма клетки, грамотрицательность, способность размножаться и сбраживать лактозу с образованием кислоты и газа при 37°С, отсутствие у этих бактерий оксидазной активности. Этих свойств явно недостаточно для признания этих бактерий представителями вида Escherichia coli, однако с точки зрения санитарного надзора этого вполне достаточно для выявления факта фекального загрязнения объекта. Поэтому, характеризуя объект по результатам санитарно-микробиологического анализа, в случае выявления бактерий с указанными свойствами не грамотно сообщать об обнаружении кишечной палочки, то есть Escherichia coli (что сплошь и рядом происходит при оповещении населения о причинах, например, запрета на купание в тех или иных водоемах в летний период), а следует использовать принятое наименование данной группы санитарно-показательных микроорганизмов.

О том, что БГКП соответствует всем основным предъявляемым к СПМ критериям, свидетельствует описание наиболее часто применяемого метода их выявления. Он называется двухэтапный бродильный метод и заключается в следующем. В первые сутки проводят посев исходного анализируемого материала, а при необходимости (например, при анализе сильно загрязненной воды или почвы) его разведений с шагом 10 в жидкую лактозо-пептонную среду, содержащую 1% лактозы и какой-либо краситель, являющийся индикатором рН среды. На дне пробирки должен находиться стеклянный поплавок. Засеянные пробирки помещают в термостат с температурой 37°С и инкубируют в течение ночи. На следующее утро просматривают пробирки и отмечают, в каких из них наблюдается помутнение среды, изменение ее цвета, соответствующее кислым значениям рН, и всплытие поплавка. Наличие указанных изменений позволяет уже после первого этапа сделать предварительное заключение о наличии бактерий искомой группы.

Для окончательного заключения необходимо провести второй этап, на котором из пробирок с указанными изменениями производят посев бактериальной петлей на плотную среду Эндо, таким образом, чтобы при росте культуры получить изолированные колонии. (Среда Эндо содержит 1% процент лактозы и оттитрованный раствором сульфита натрия до слабо-розового цвета основной фуксин (рН готовой среды 7,4). При росте на такой среде бактерий, образующих при утилизации лактозы органические кислоты, фуксин из-за сдвига рН в кислую сторону приобретает интесивную красную окраску.) Засеянные чашки помещают в термостат и инкубируют в течение ночи при 37°С, после чего просматривают чашки с целью определения цвета сформировавшихся колоний. Наличие колоний темно-красного цвета, иногда с металлическим блеском, подтверждает принадлежность бактерий к искомой группе. Однако для окончательного вывода осуществляют приготовление мазка, для чего берут половину колонии, а вторую половину используют для определения оксидазной активности.

Приготовленный мазок фиксируют над пламенем спиртовки и окрашивают по методу Грама. Для определения оксидазной активности половину анализируемой колонии растирают по поверхности филдьтровальной бумаги, пропитанной раствором диметил-пара-фенилендиамина. При наличии оксидазной активности бумага должна окрашиваться в красный цвет.

После микроскопирования анализируемых мазков и обнаружения в них палочкообразных бактерий розового цвета при отсутствии у изучаемых бактерий оксидазной активности делается окончательный вывод о присутствии в анализируемом образце бактерий группы кишечных палочек.

Как видно, все применяемые для выявления БГКП методы легко выполнимы в обычной бактериологической лаборатории, не требуют высоких материальных затрат и реализуются в течение 48 часов.

Описанный метод позволяет не только обнаружить присутствие БГКП, но и определить их количество. Зная, какие объемы анализируемых проб и соответствующих разведений засевались на первом этапе, рассчитывают количество анализируемых бактерий в данном образце. Результаты таких расчетов могут быть выражены либо в виде титра, либо в виде индекса. Это два взаимосвязанных санитарно-микробиологических показателя, применяемых для оценки загрязненности объектов конкретными группами санитарно-показательных микроорганизмов.

Титр – это выраженное в граммах или кубических сантиметрах (миллилитрах) количество исследуемого материала, в которых содержится один представитель конкретной группы СПМ.

Индекс – это количество микроорганизмов конкретной группы в определенном объеме или навеске анализируемого объекта. Для большинства твердых и жидких нестерилизованных объектов расчет приводится на 1 грамм или 1 мл, для подвергающейся специальной очистке или артезианской воды (питьевая вода) – на 1 литр, для воздуха – на 1 м3.

Оба эти показателя, приводимые для одного конкретного объекта, отражают одну и ту же степень обсемененности бактериями данной группы СПМ и могут быть при желании конвертированы. Например, для питьевой воды из городской водопроводной сети по БГКП допустимым считается титр 333. Это значит, что при выражении через индекс питьевая вода в городах может содержать 3 клетки БГКП в одном литре.

Следует отметить, что в русскоязычной литературе по санитарии и гигиене, публикуемой в конце-20-го – начале 21-го веков, для обозначения бактерий группы кишечных палочек, сбраживающих лактозу с образованием кислоты и газа при 37°С, используется еще одно название – общие колиформные бактерии (сокращенно ОКБ). Это связано с тем, что по мере накопления сведений об обитающих в кишечнике человека грамотрицательных бактериях выявлялась неоднородность БГКП, как группы. В частности, выяснилось, что некоторые бактерии этой группы отличаются от остальных способностью делиться и сбраживать лактозу при температуре 43-44,5°С, и одновременно обладают меньшей выживаемостью вне кишечника хозяев, чем другие БГКП. Такие сведения послужили основанием для выделения отдельной группы санитарно-показательных микроорганизмов, указывающих не просто на фекальное загрязнение объекта, а на так называемое свежее фекальное загрязнение, произошедшее в течение трех суток до отбора проб. Эта группа фигурирует в литературе и нормативных документах под тремя названиями – фекальные кишечные палочки (они же фекальные колиформные бактерии, сокращенно ФКП и ФКБ соответственно) и термотолерантные колиформные бактерии (ТКБ). Часть медиков и санитарных микробиологов рассматривают эту группу СПМ не как отдельную, а как подгруппу внутри БГКП.

Для выявления бактерий этой группы (подгруппы) из трех объемов лактозо-пептонной среды, в которых при суточной инкубации при 37°С образовались кислота и газ, проводят пересев бактериальной петлей в жидкую лактозную среду с борной кислотой и проводят культивирование в течение суток при 43°С. Возможно также использование вместо лактозной среды с борной кислотой желчно-лактозной среды с красителем бриллиантовым зеленым или красителем кристаллическим фиолетовым (среда Кесслера), но инкубирование в этом случае проводится при 44,5°С. (Добавление в среды борной кислоты или указанных красителей препятствует размножению грамположительных бактерий, что позволяет некоторым авторам при описании методик называть эти среды элективными, то есть средами обогащения). Во всех засеваемых емкостях должны находиться утопленные поплавки, поскольку результат фиксируется по помутнению среды и газообразованию.

При наличии роста в указанных условиях и всплытии поплавков делается предварительный вывод о присутствии ФКП (ТКБ), для окончательного вывода проводят второй этап описанной выше методики выявление БГКП (ОКБ). Темно-красные колонии на среде Эндо, грамотрицательные палочки в микроскопируемом мазке и отсутствие оксидазной активности подтверждают предварительный вывод.

Показано, что некоторые штаммы, отнесенные по санитарному анализу к ФКБ, являются, по сути, энторопатогенными вариантами Escherichia coli и могут служить причиной пищевых токсикоинфекций. Исходя из этого, в некоторых нормативных документах, регламентирующих санитарный анализ продуктов питания, персонала и оборудования пищеблоков, бактерии, выявленные на среде Кесслера, могут проходить под названием Escherichia coli или coli -группа. Еще раз подчеркнем, что с микробиологической точки зрения это неверно, так при санитарном анализе полной видовой идентификации не проводится.

Уже на начальных этапах применения БГКП как указывающих на фекальное загрязнение санитарно-показательных микроорганизмов выяснилось, что проводимый на их основе санитарный анализ не является абсолютно точным. Поэтому поиск кандидатов в СПМ был продолжен и в 1910 году в качестве индикаторов фекального загрязнения были предложены грамположительные кокки, в те времена относимые к роду Streptococcus. Два вида этого рода постоянно обнаруживались микробиологами в содержимом кишечника человека и некоторых видов высших животных, из-за чего и получили свои названия - S. faecalis и S. faecium, что переводится как фекальный и кишечный. Уже тогда их условно называли энтерококками, подчеркивая тем самым их приверженность к обитанию в пищеварительном тракте, и именно под этим названием они вошли в санитарную микробиологию как группа СПМ. В 1984 году эти два вида были перенесены из рода Streptococcus в новый род Enterococcus с сохранением их видовых эпитетов и теперь называются E. faecalis и E. faecium.

Энтерококки, как санитарно-показательные микрорганизмы, отвечают всем основным предъявляемым к СПМ критериям, и даже имеют некоторые преимущества. В частности, они менее устойчивы к факторам окружающей среды, чем БГКП, поэтому их наличие всегда трактуют как свежее фекальное загрязнение. Кроме того, у энтерококков нет аналогов среди свободноживущих бактерий, что уменьшает вероятность получения ложно-положительных результатов при санитарном анализе. В отличие от БГКП, они выдерживают температуру 60°С, поэтому их выделение используют для проверки качества пастеризации ряда пищевых продуктов (в частности, молока, котлет и подобных мясных изделий), и более устойчивы к обработке воды хлором, что узаконило энтерококкметрию, как обязательный пункт проверки воды.

Для их быстрого выявления в течение 20 века предлагались различные методы, которые основывались на использовании сред, содержащих вещества, подавляющие рост грамотрицательных бактерий, и вещества, дающие при росте энтерококков выраженные цветные реакции. В качестве селектирующих агентов с 30-х годов 20-го века использовали азид натрия, а со второй половины двадцатого века антибиотики – полимиксин или канамицин.

Как один из вариантов таких методик можно привести посев анализируемых проб в жидкую щелочно-полимиксиновую среду, содержащую мясо-пептонный бульон, дрожжевой экстракт, глюкозу, хлорид натрия, карбонат натрия, гидрофосфат натрия и бромтимоловый синий как индикатор на рН. Значение рН исходной среды – 10,4. Перед использованием в среду добавляется антибиотик полимиксин до конечной концентрации 200 ЕД на мл. Если после культивирования при 37°С в течение ночи регистрируется помутнение и изменение цвета среды на желтый (закисление среды), производится высев петлей на плотную молочно-ингибиторную среду и инкубирование посевов в течение ночи. Молочно-ингибиторная среда представляет собой мясо-пептонный агар, содержащий 20% обезжиренного молока, 0,02% телурита калия и 0,012% кристаллического фиолетового. Колонии энтерококков на такой среде крупные, гладкие, имеют темно-серую или черную окраску, иногда вокруг колонии наблюдается просветление среды из-за расщепления казеина выделяемыми энтерококками протеазами. Наличие в приготовленных из таких колоний мазках кокков, образующих короткие цепочки, позволяет сделать заключение о наличии СПМ группы энтерококков.

При определении энтерококков в относительно чистой воде (например, морской или питьевой) используют фильтрование определенных объемов воды через нитро-целлюлозные фильтры с диаметром пор 0,45 мкм, после чего фильтр помещают на одну из плотных селективных сред, чаще всего для этих целей используют среду Сланеца-Бертли или среду Турчинского. Формирование на этих средах колоний определенной морфологии и цвета считают достаточным для определения принадлежности к данной группе СПМ.

Еще одной основной группой санитарно-показательных микроорганизмов являются анаэробные спорообразующие сульфитредуцирующие бактерии. Их также относят к СПМ, указывающим на фекальное загрязнение среды, так как входящие в нее бактерии постоянно обитают в толстом кишечнике человека и других позвоночных. Однако присутствие в объектах окружающей среды бактерий этой группы не трактуется как косвенное свидетельство наличия способных к эпидемическому распространению патогенов, что отличает их от истинных СПМ. Тем не менее, значительное превышение нормальных значений титра по этой группе автоматически ставит объект под запрет использования по санитарным показателям.

Это парадокс легко объясним, если знать, что эта группа включает в себя представителей рода Clostridium. Эти симбиотические клостридии, обитая в просвете толстого кишечника, проявляют себя как комменсалы, но при попадании на раневые поверхности и возникновении в мышечных тканях анаэробных условий проявляют весь свой набор факторов патогенности, вызывая тяжелейшие постраневые инфекции со смертельным исходом – столбняк и гангрену. Кроме того, пероральное попадание таких клостридий в верхние отделы тонкого кишечника приводит к развитию энтеритов и пищевых токсикоинфекций. Особое значение имеет тот факт, что являясь облигатными анаэробами, они редко находят условия для активного существования вне толстого кишечника животных и при попадании в окружающую среду быстро переходят в состояние споры.

Основным местом сохранения и накопления спор этих клостридий являются почвы, загрязняемые в течение длительного времени фекалиями животных или людей. Из почв они разносятся водой и ветром, попадают в водоемы и в производимые с нарушением санитарных норм пищевые продукты. Поэтому при санитарном анализе не только почв, но и всех используемых человеком объектов окружающей среды их определение является обязательным.

Известно, что основными видами таких клостридий являются Clostridium tetani, C.perfringens, C.novyi, C.septicum, C.botulinum. Но при плановых санитарных мероприятиях для определения статус-контроля (соответствия действующих объектов законодательно принятым для них санитарным правилам и нормам) и при плановом производственном контроле из-за длительности методик и экономии средств не осуществляется видовая идентификация, а проводится выявление этой группы СПМ. Следует отметить, что основное название для этой группы – анаэробные спорообразующие сульфитредуцирующие бактерии – в медицинской литературе достаточно часто укорачивают, используя как синонимы следующие: сульфитвосстанавливающие клостридии, сульфитредуцирующие клостридии, иногда даже группа Clostridium perfringens. Как и в случае с БГКП, применять такое название считается неграмотным – при обычном санитарном анализе бактерии не определяются до вида. Видовая идентификация проводится только при чрезвычайном, а не плановом контроле и на основании специальных распоряжений в случае необходимости (например, при массовых пищевых отравлениях с тяжелыми последствиями или других чрезвычайных обстоятельствах).

Одним из основных методов выявления анаэробных спорообразующих сульфитредуцирующих бактерий заключается в следующем. Анализируемую жидкость (воду или предварительно полученную взвесь твердого материала, например, «почвенную болтушку») разводят с шагом десять и из каждого разведения переносят по 1 мл в две пробирки, формируя тем самым два так называемых параллельных ряда пробирок. Один ряд пробирок прогревают при температуре 80°С в течение 15 минут или при 90°С в течение 10 минут, второй ряд оставляют без температурного воздействия. Затем во все пробирки обоих рядов вносят расплавленную и охлажденную до 45°С среду Вильсона-Блера в таком количестве, чтобы до края пробирки оставалось около 1 см. Содержимое пробирки быстро перемешивают круговыми движениями и опускают ее для быстрого охлаждения в холодную воду, после чего немедленно закрывают пробирку резиновой пробкой. Эта процедура необходима для создания внутри пробирки анаэробных условий – среда вытесняет большую часть воздуха, а резиновая пробка предотвратит его попадание внутрь пробирки при культивировании, которое положено проводить в течение 24 часов при температуре 43°С.

При учете результатов просматривают пробирки на просвет и регистрируют наличие и цвет сформировавшихся в толще агара колоний. Колонии бактерий анализируемой группы должны иметь в среде Вильсона-Блера черный цвет, развивающийся в результате образования при жизнедеятельности бактерий этой группы сульфида железа. Указанная среда (ее второе название – железо-сульфитный агар) представляет собой обогащенный глюкозой мясо-пептонный агар, содержащий в определенных пропорциях сульфит натрия и хлорное железо. Способность редуцировать сульфит-ионы до сульфид-ионов является отличительным признаком симбиотических клостридий, который и выявляется при взаимодействии сульфид-ионов с ионами железа.

При учете сравнивают между собой пробирки из параллельных рядов – приблизительно одинаковое количество колоний черного цвета в прогретых и непрогретых пробирках указывает на формирование таких колоний из прорастающих спор, тем самым подтверждается способность к спорообразованию бактерий данной группы.

Для окончательного заключения из развившихся в толще агара колоний бактериальной петлей переносят на предметное стекло, приготавливают мазок и окрашивают его по Граму. Наличие в препарате палочкообразных грамположительных бактерий подтверждает выявление СПМ группы анаэробные спорообразующие сульфитредуцирующие бактерии.

Для выявления фекального загрязнения кроме выше указанных групп СПМ могут использоваться еще две – это бактерии группы протея и так называемые колифаги. Данные по этим группам менее показательны и они обычно дополняют сведения, полученные при выделении основных групп СПМ.

В толстом кищечнике животных и человека обитают представители всех пяти видов рода Proteus, однако эти же виды широко распространены в водоемах и почвах. Поэтому о фекальном загрязнении может свидетельствовать только значительное отличие индекса или титра для этой группы по сравнению с нормальными для данного объекта значениями. Метод выявления бактерий группы протея основан на их способности перемещаться по поверхности плотных питательных сред лучше, чем другие подвижные бактерии. Он заключается в посеве бактериальной петлей из анализируемого материала и его десятикратных разведений в конденсационную воду свежеприготовленного скошенного агара. Посев необходимо производить таким образом, чтобы петля не соприкасалась с поверхностью среды выше конденсационной воды. После 24-48-часового культивирования пробирок в вертикальном положении при 37°С просматривают поверхность скошенного агара. Наличие прозрачной пленки бактериального роста на поверхности указывает на присутствие бактерий искомой группы.

Колифаги, как группа санитарно-показательных микроорганизмов, в корне отличаются от описанных выше СПМ тем, что представляют собой вирусы. Как известно, вирусы способны репродуцироваться только в клетках своего хозяина и проявляют при этом ярко выраженную хозяйскую специфичность. У постоянных обитателей толстого кишечника млекопитающих также есть свои вирусы, часть из них - бактериофаги кишечной палочки Escherichia coli - называют колифагами. Поскольку кишечная палочка редко встречается в окружающей среде в значительных количествах, размножение колифагов в окружающей среде не происходит, а, значит, их наличие в анализируемых объектах трактуется как фекальное загрязнение.

Показано, что вирусные частицы колифагов могут сохраняться в водоемах и почвах в жизнеспособном состоянии более 9 месяцев, поэтому оценивать по их количеству загрязненность бактериальными патогенами проблематично. Но объекты окружающей среды могут быть опасны в плане распространения вирусных заболеваний человека, в частности, кишечных инфекций, вызываемых энтеровирусами, для которых выживаемость в почве и воде сопоставима с выживаемостью бактериофагов. Поэтому к концу 20-го века интерес санитарных микробиологов к колифагам, как дополнительной группе СПМ, возродился на новой основе, и часть стран ввела определение колифагов в схемы обязательного контроля за качеством питьевой воды из систем централизованного водоснабжения (водопроводная вода в городах).




Поделиться с друзьями:


Дата добавления: 2014-11-16; Просмотров: 396; Нарушение авторских прав?; Мы поможем в написании вашей работы!


Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет



studopedia.su - Студопедия (2013 - 2024) год. Все материалы представленные на сайте исключительно с целью ознакомления читателями и не преследуют коммерческих целей или нарушение авторских прав! Последнее добавление




Генерация страницы за: 0.047 сек.