Постановка пробы на брожение

Описание работы

Приборы и материалы

Лабораторная работа 11. Использование неорганического фосфата в процессе брожения

Процесс спиртового брожения и гликолиза протекает в две стадии. На 1-й стадии глюкоза фосфорилируется ферментативным путем за счет АТФ и в конечном счете расщепляется на две молекулы глицepaльдeгид-3-фoсфaтa (ГАФ). На 2-й стадии брожения ГАФ окисляется за счет НАД⁺, присоединяя с помощью фермента ГАФ-дегидрогеназы неорганический фосфат:

Таким образом, в этой реакции происходит связывание неор­ганического фосфата. В условиях опыта в процессе брожения концентрация неорганического фосфата в растворе понижается. О количестве неорганического фосфата судят по реакции образова­ния комплексной фосфорно-молибденовой кислоты, которую затем восстанавливают в молибденовую синь.

1 Цель – провести спиртовое брожение и подтвердить использование неорганического фосфора в процессе брожения

Термостат

ФЭК

Пивные дрожжи

Глюкоза (порошок)

Дистиллированная вода

Раствор фосфорно-кислых солей

ТХУ 10 %

Реактив А

Реактив Б

Стандартный раствор калия фосфорнокислого однозамещенного

2 г тщательно отмытых и высушенных пивных дрожжей расти­рают в ступке с 2 г глюкозы и 100 мл воды. Смесь переносят в колбу и добавляют 5 мл раствора фосфорно-кислых солей, тщатель­но перемешивают и тотчас отмеривают 2 мл смеси и переносят в пробирку, содержащую 2 мл 10 % раствора трихлоруксусной кислоты (проба № 1). Оставшуюся смесь помещают в термостат при 37 °С и затем через 30 мин (проба № 2), через 1 ч (проба № 3) и через 1,5 ч (проба № 4) берут по 2 мл бродящей смеси, переносят в соответственно пронумерованные пробирки, содержащие по 2 мл трихлоруксусной кислоты. Трихлоруксусная кислота, осаждая белки и ферменты, останавливает процесс брожения. Каждую из четырех проб фильтруют через складчатый фильтр, и в полученных безбелковых фильтрах определяют неорганический фосфат.

Дата добавления: 2015-04-24