Химия и обмен липидов

Определение содержания глюкозы

Построение калибровочной кривой для определения количества глюкозы

Описание работы

Приборы и материалы

Лабораторная работа 12. Количественное определение сахаров в питательной среде

Для количественного определения моносахаридов широко используется реакция окисления моносахаридов некоторыми сла­быми окислителями, например, щелочными растворами оксидов металлов (меди или висмута). Окисление сахаров идет за счет свободного гликозидного гидроксила. Сахара, которые дают реак­ции с указанными оксидами металлов, носят название восстанавливающих (редуцирующих) в противоположность невосстанавливающим углеводам, не содержащим свободных полуацетальных гидроксилов.

Предлагаемый метод основан на реакции конденсации глюкозы (и других углеводов) с о-толуидином.

1 Цель работы – определить количество глюкозы

Электроплитка

Водяная баня

ФЭК

Раствор о-толуидина, стабилизированного в уксусной кислоте

Питательная среда (задача)

Дистиллированная вода

Готовят стандартный раствор глюкозы, содержащий 2 мг глюкозы в одном миллилитре. Приготовление проб для построения калиб­ровочной кривой проводят по схеме в таблице 6.

В пять пробирок с притертой пробкой отмеряют по 2 мл стабили­зированного раствора о-толуидина. К ним приливают по 0,2 мл из пробирок с полученными растворами глюкозы с разной концентрацией.

Таблица 6 – Схема приготовления проб для построения калибровочной кривой

№ пробы	Стандартный раствор глюкозы, мл	Вода, мл	Объем пробы для анализа, мл	Концентрация глюкозы, мг/мл	Раствор о-толуидина, мл
1.	0,2	0,8	0,2	0,4	2,0
2.	0,4	0,6	0,2	0,8	2,0
3.	0,6	0,4	0,2	1,2	2,0
4.	0,8	0,2	0,2	1,6	2,0
5.	1,0	-	0,2	2,0	2,0

Параллельно ставят контрольную пpoбу, где вместо раствора глюкозы берут 0,2 мл дистиллированной воды.

Пробирки с пробами кипятят на водяной бане 10 мин, затем добавляют во все пробирки по 2 мл дистиллированной воды и фотометрируют при длине волны 575 нм против контроля. По полученным данным строят калибровочную кривую. На оси абсцисс откладывают количество мг глюкозы в 1 мл; на оси ординат - оптическую плотность раствора при 575 нм.

Параллельно с пробами для построения калибровочной кривой делают опытную пробу (задачу). Для этого в пробирки с притертой пробкой отмеряют 2 мл стабили­зированного раствора о-толуидина и добавляют 0,2 мл исследуе­мого раствора питательной среды (задача). Пробирки закрывают притертой пробкой и помещают на кипящую водяную баню на 10 мин. Раствор окрашивается в сине-зеленый цвет. Затем пробирки охлаждают до 20°С под водопроводной водой и прибавляют 2,0 мл дистиллированной воды.

Оптическую плотность полученных растворов определяют на фотоэлектроколориметре, применяя светофильтры с длиной волны 575 нм.

Расчет содержания глюкозы в исследуемых пробах ведут по калибровочной кривой.

С давних пор липиды считаются основными и обязательными компонентами всех типов микробных клеток. Многие вирусы также содержат липиды. В настоящее время очевидно, что состав липидов, их обмен и, вероятно, их функции, представляют собой именно те особенности, по которым микроорганизмы, и особенно бактерии, наиболее резко отличаются от других форм жизни. В последние годы показано, что в бактериальных клетках присутст­вуют не только многие известные липоидные вещества, но также и разнообразные редкие, необычные и даже уникальные соединения. Бактерии содержат небольшие количества свободных жирных кислот и глицеридов. Бактериальные липиды в основном представлены фосфолипидами. Липиды дрожжей и грибов абсолютно сходны с липидами растений и совершенно не похожи на липиды бактерий. Эти микроорганизмы действительно запасают глицериды и исполь­зуют их для аккумулирования энергии почти так же, как животные.

Дата добавления: 2015-04-24