Описание работы

Приборы и материалы

Термостат

Сухие дрожжи

Дистиллированная вода

Толуол

Формоловая смесь

Раствор гидроксида натрия 0,01 М

Раствор соляной кислоты 0,01 М

Навеску 0,4 г дрожжей, высушенных при комнатной температуре, растирают с небольшим количеством стеклянного песка (0,3-0,4 г), добавляя маленькими порциями 20 мл дистиллированной воды. Смесь переливают в колбочку, прибавляют 4 капли толу­ола и перемешивают. В чистую пробирку отбирают третью часть (6-7 мл) общего количества смеси, а остальные 2/3 ставят в термостат при температуре 30-40⁰С на 1-2 часа для автолиза. Отобранную порцию смеси фильтруют и фильтрат используют для определения исходного содержания аминогрупп до начала автолиза. Заготовляют две пробы: контрольную и опытную.

Контрольная проба. В коническую колбочку наливают 5 мл дистиллированной воды, 2,5 мл формоловой смеси и 3 мл 0,01 М раствора щелочи. Жидкость приобретает ярко-красное окрашивание (рН смеси больше 10). Содержимое контрольной пробы титруют 0,01 М раствором соляной или серной кислоты до бледно-розовой окраски (рН 8,3) и прибавляют 0,2 мл (4-5 капель) 0,01 М раствора щелочи. Жидкость принимает розово-красный цвет (рН 9,1).

Опытная проба. В коническую колбочку отмеривают пипеткой 5 мл полученного фильтрата, добавляют 2,5 мл формоловой смеси и титруют 0,01 М раствором щелочи до розово-красного цвета, т.е. до тех пор, пока окраска жидкости в опытной пробе не станет одинаковой с окраской контрольной пробы. Записывают количество щелочи, пошедшей на титрование опытной пробы.

Через один час из смеси, подвергшейся автолизу, отбирают пробу 6,5 мл и фильтруют ее. Затем отбирают пипеткой 5 мл фильтрата и заготовляют опытную пробу. Записывают количество щелочи, пошедшей на титрование этой опытной пробы.

Через 2 часа оставшуюся смесь, подвергавшуюся автолизу, фильтруют, отбирают 5 мл фильтрата и готовят опытную пробу. Записывают количество щелочи, пошедшей на титрование.

Прирост свободных карбоксильных, а, следовательно, и аминных групп, выражают в миллиграммах азота, для чего полученную разность, выраженную в миллилитрах 0,01 М раствора щелочи, умножают на грамм-эквивалент азота (0,14). Результаты работы заносят в таблицу 8.

Таблица 8 – Определение прироста аминоазота в процессе автолиза

Стадии автолиза	Объем NаОН, пошедший на титрование	Разность объемов NаОН, пошедшей на титрование опытной и контрольной пробы, мл	Прирост аминоазота, мг
Автолиз, 0 ч (А)		-
Автолиз, 1 ч (В1)		В1 - А	(В1 - А) Х 0,14
Автолиз, 2 ч (В2)		В2 - А	(В2 - А) Х 0,14

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Филиппович Ю.Б., Егорова Т.А., Севастьянова Г.А. Практикум по общей биохимии – М.: Просвещение, 1982. – 311 с.

2. Кушманова О.Д., Ивченко Г.М. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. – М.: Медицина, 1983. –272 с.

3. Добрынина В.И., Свешникова Е.Я. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. – М.: Медицина, 1967. – 343 с.

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ.. 2

Лабораторная работа 1. Действие фермента амилазы на крахмал. 2

Лабораторная работа 2. Определение оптимальной температуры действия фермента амилазы слюны 4

Лабораторная работа 3. Влияние значения реакции среды на активность фермента амилазы.. 5

Лабораторная работа 4. Влияние активаторов и ингибиторов на активность фермента амилазы.. 6

Лабораторная работа 5. Специфичность действия ферментов. 7

Лабораторная работа 6. Определение активности сукцинатдегидрогеназы.. 8

Лабораторная работа 7. Обнаружение тирозиназы в картофеле. 10

Лабораторная работа 8. Определение активности каталазы.. 11

2. ОБМЕН УГЛЕВОДОВ.. 13

Лабораторная работа 9. Обнаружение гликогена в биомассе. 14

Лабораторная работа 10. Спиртовое брожение. 15

Лабораторная работа 11. Использование неорганического фосфата в процессе брожения. 16

Лабораторная работа 12. Количественное определение сахаров в питательной среде. 19

3. ХИМИЯ И ОБМЕН ЛИПИДОВ.. 21

Лабораторная работа 13. Фракционирование липидов дрожжей методом тонкослойной хроматографии 21

Лабораторная работа 14. Количественное определение белка по содержанию общего азота. 24

Лабораторная работа 15. Определение нарастания аминоазота в процессе автолиза. 28

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ... 31

Дата добавления: 2015-04-24