Подготовка к испытанию

Определение диастазного числа меда

Принцип метода. Метод основан на колориметрическом определении количества субстрата, расщепленного в условиях проведения ферментативной реакции, и последующем вычислении диастазного числа.

Диастазное число характеризует активность амилолитических ферментов меда.

Диастазное число выражают количеством см³ раствора крахмала массовой долей 1%, которое разлагается за 1 ч амилолитическими ферментами, содержащимися в 1 г безводного вещества меда. 1 см³ раствора крахмала соответствует 1 единице активности.

Цель: овладеть методикой диастазного числа меда и определить качество меда по данному показателю.

Задачи:

1. Определеить массовую долю воды в меде;

2. Определить диастазное число предложенных образцов меда;

3. Сравнить полученные результаты с действующим ГОСТом.

Реактивы и растворы:

1. Крахмал растворимый для йодометрии (0,25% раствор);

2. Кислота уксусная ледяная, х.ч. (0,2 М раствор, 50 мл);

3. Натрий уксуснокислый, х.ч. (0,2 М раствор, 150 мл);

4. Натрий хлористый (0,1 М раствор, 50 мл);

5. Йод (0,25 М раствор, не более 50 мл);

6. 2,4-Динитрофенол, ч.д.а.

Порядок работы:

1. Определение массовой доли воды. Метод основан на зависимости показателя преломления меда от содержания в нем воды.

1.1.Подготовка к испытанию. Для проведения испытания используют жидкий мед. В случае, если мед закристаллизован, помещают около 1 см³ меда в пробирку, плотно закрывают резиновой пробкой и нагревают на водяной бане при температуре 60ºС до полного растворения кристаллов. Затем пробирку охлаждают до темературы воздуха в лаборатории. Воду, сконденсировавшуюся на внутренней поверхности стенок пробирки, и массу меда тщательно перемешивают стеклянной палочкой.

1.2.Проведение испытания. Одну каплю меда наносят на призму рефрактометра и измеряют показатель преломления.

1.2.Обработка результатов. Полученный показатель преломления меда пересчитывают на массовую долю воды в меде по таблице 3.2.

Если определения проводят при температуре ниже или выше 20⁰С, то вводят поправку на каждый градус Цельсия: для температур выше 20⁰С – прибавляют к показателю преломления 0,00023; для температур ниже 20⁰С – вычитают из показателя преломления 0,00023.

2. Определение диастазного числа меда.

2.1.1.Приготовление раствора меда. 5 г меда, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 50 см³. 1 см³ такого раствора содержит 0,1 г меда.

2.1.2.Приготовление ацетатного буфера (100 мл). Ацетатный буферный раствор концентрации 0,2 моль/л с рН 5,0 приготавливают, смешивая одну объемную часть раствора уксусной кислоты и три объемные части уксуснокислого натрия. В полученном растворе растворяют 2,4-динитрофенол с таким расчетом, чтобы его концентрация в комбинированном реактиве составила 0,05% (0,14% – 0,14 г 2,4-динитрофенола на 100 мл). Проверяют рН раствора потенциометрически и в случае отклонений от рН 5,0 его корректируют, добавляя раствор уксусной кислоты концентрации 0,2 м/л или раствор ацетата натрия концентрации 0,2 м/л.

2.1.3.Приготовление 0,25% раствора крахмала. 0,25 г крахмала, взвешенного с погрешностью не более 0,001 г, размешивают в стаканчике вместимостью 50 мл с 10–20 мл дистиллированной воды и количественно переносят в коническую колбу, где не сильно кипит 80–90 мл дистиллированной воды. Кипение продолжают 2–3 минуты. Колбу охлаждают до 20ºС, содержимое количественно переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки.

2.1.4. Приготовление комбинированного реактива (100 мл). Комбинированный реактив готовят из восьми объемных частей раствора крахмала (0,25%), пяти объемных частей буферного раствора с 2,4-динитрофенолом и одной объемной части раствора хлорида натрия (0,1 м/л). Полученную смесь тщательно встряхивают.

2.2. Проведение испытания. В сухую пробирку отмеривают 14,0 см³ комбинированного реактива. Пробирку закрывают резиновой пробкой и помещают на 10 мин в водяную баню при температуре 40ºС. Затем в пробирку вносят пипеткой 1,0 см³ раствора меда. Содержимое перемешивают пятикратным перевертыванием, пробирку вновь помещают на водяную баню, одновременно включая секундомер. Пробирку выдерживают на водяной бане в течение 15 мин при температуре (40±0,2)ºС.

Пипеткой отбирают 2,0 см³ реакционной смеси, которую вносят при перемешивании в мерную колбу вместимостью 50 см³, содержащую 40 см³ воды и 1 см³ раствора йода, имеющих температуру 20ºС. Раствор доводят водой до метки. Колбу закрывают пробкой, содержимое хорошо перемешивают и выдерживают на водяной бане при 20ºС в течение 10 мин.

Одновременно проводят контрольный опыт, заменяя раствор меда дистиллированной водой.

Оптическую плотность измеряют на фотоэлектроколориметре против воды при светофильтре с длиной волны 582 или 590 нм, используя кювету с рабочей длиной 10мм. Колориметрируя растворы, определяют значения оптической плотности испытуемого раствора (D_исп) и контрольного опыта (D_к) с точностью отсчета 0,001.

2.3.Обработка результатов. Диастазное число меда (X ₄) в пересчете на 1г безводного вещества вычисляют по формуле:

(D_k – D_исп) × 80 × 100

Х ₄ = ¾¾¾¾¾¾¾¾¾,

D_k × (100 – W)

где	Dk –	оптическая плотность раствора, определенная в контрольном опыте;
	Dисп –	оптическая плотность испытуемого раствора;
	80 –	коэффициент пересчета;
	W –	массовая доля воды в меде, %.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов 2 параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений диастазного числа не должны превышать 0,5 ед.

Сравнить полученные результаты с требованиями, предъявляемыми к меду согласно ГОСТ.

§ 4.5. Определение массовой доли редуцирующих сахаров и сахарозы в натуральном меде

Принцип метода. Сущность метода заключается в определении оптической плотности раствора феррицианида после того, как он прореагирует с редуцирующими сахарами меда. Метод испытания включает определение сахаров меда до и после инверсии.

Цель: овладеть методикой определения массовой доли редуцирующих сахаров и сахарозы в натуральном меде и определить качество меда по данному показателю.

Задачи:

1. Определить массовую долю редуцирующих сахаров до инверсии в предложенном образце меда;

2. Определить массовую долю общего сахара после инверсии;

3. Сравнить полученные результаты с действующим ГОСТом.

Реактивы и растворы:

1. Калий железосинеродистый, х.ч.;

2. Натрия или калия гидроокись, х.ч. (25%-ный раствор);

3. Сахароза, х.ч.;

4. Кислота соляная, конц.;

5. Метиловый оранжевый (0,2%-ный раствор).

Порядок работы:

1.Приготовление стандартного раствора инвертного сахара. 0,381 г предварительно высушенных в эксикаторе в течение 3 суток сахарозы или сахара рафинада, взвешенных с погрешностью не более 0,001г, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 200 см³ с таким расчетом, чтобы общее количество раствора было не более 100 см³, прибавляют 5 см³ концентрированной соляной кислоты, помещают в колбу термометр и ставят в нагретую до 80–82ºС водяную баню. Содержимое колбы нагревают до 67–70ºС и выдерживают колбу при этой температуре точно 5 мин. Затем колбу с содержимым немедленно охлаждают до 20ºС, добавляют 1 каплю раствора метилового оранжевого, нейтрализуют раствором калия или натрия гидроокиси массовой доли 25%, доводят содержимое колбы дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают.

Полученный раствор содержит 0,4г инвертного сахара в 200 см³ или 2 мг сахара в 1 см³.

2.Колорометрирование стандартного раствора и построение градуировочногографика. В сухие конические колбы вместимостью по 100 см³ отмеривают пипетками следующие объемы растворов:

	V (25% р-ра NaOH), см^3	V (феррицианида), см^3	V (стандартного раствора инвертного сахара), мл	V (H2O), мл
	5 см^3	20 см^3	5,5 мл	4,5 мл
	6,0 мл	4,0 мл
	6,5 мл	3,5 мл
	7,0 мл	3,0 мл
	7,5 мл	2,5 мл
	8,0 мл	2,0 мл
			8,5 мл	1,5 мл

Объем жидкости в каждой колбе должен быть 35 см³.

Содержимое колб нагревают до кипения и кипятят ровно 1 мин, немедленно охлаждают и измеряют оптическую плотность на фотоколориметре против воды со светофильтром, имеющим максимум светопропускания при l = 440 нм, используя кювету с толщиной слоя раствора 1 см.

Оптическую плотность определяют в каждом растворе не менее 3 раз и из полученных данных вычисляют среднее арифметическое значение каждого результата.

Результаты определений наносят на миллиметровую бумагу, откладывая на оси ординат значения оптической плотности, а на оси абсцисс соответствующие этим значениям количества инвертного сахара (11, 12, 13, 14, 15, 16 и 17 мг), после чего строят градуировочный график, который используется для определения содержания редуцирующих сахаров и общего сахара после инверсии.

3. Определение массовой доли редуцирующих сахаров до инверсии. Навеску меда массой 2 г, взвешенную с погрешностью не более 0,001 г, растворяют в колбе вместимостью 100 см³, 10 см³ этого раствора переносят в чистую колбу вместимостью 100 см³ и доводят до метки (получают рабочий раствор меда).

В коническую колбу вместимостью 100 см³ вносят 20 см³ раствора феррицианида, 5 см³ 25%-ного раствора гидроокиси калия или натрия и 10 см³ рабочего раствора меда, нагревают до кипения и кипятят ровно 1 мин, быстро охлаждают и определяют оптическую плотность на фотоколориметре. Так как при значениях оптической плотности в интервалах 0,15–0,80 получают наиболее точные результаты, то в случае получения других значений оптической плотности определение повторяют, соответственно изменив количество добавляемого к феррицианиду испытуемого раствора.

По градуировочному графику находят содержание редуцирующих сахаров (в 10 мл расбочего раствора меда), рассчитывают процентное содержание редуцирующих сахаров в меде (Х ₁).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами 2 параллельных определений не должны превышать 0,5%.

4.Определение массовой доли общего сахара после инверсии. В колбу вместимостью 200 см³ отмеривают пипеткой 20 см³ раствора навески меда (2 г в 100 см³ раствора), добавляют 80 см³ дистиллированной воды и 5 см³ концентрированной соляной кислоты, инверсию проводят как указано в пункте 1.

Определение содержания общего сахара после инверсии проводят также, как и определение содержания редуцирующего сахара до инверсии.

По градуировочному графику находят содержание редуцирующих сахаров после инверсии (в 20 мл раствора меда), рассчитывают процентное содержание (Х ₂).

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами 2 параллельных определений не должны превышать 0,5%.

5.Обработка результатов. По разнице между содержанием редуцирующих сахаров после и до инверсии, определенным по п.4 и п.3 соответственно, вычисляют массовую долю сахарозы в меде (Х₃):

X ₃ = X ₂ – X ₁,

где	X 2 –	массовая доля общих сахаров после инверсии;
	X 1 –	массовая доля сахаров до инверсии.

Массовую долю редуцирующих сахаров или сахарозы в процентах пересчитывают на безводное вещество умножением массовой доли редуцирующих сахаров (сахарозы) на коэффициент h:

h = 100/(100 – W),

где

W –

массовая доля воды в меде.

Сравнить полученные результаты с требованиями, предъявляемыми к меду согласно ГОСТ, и сделать вывод о качестве анализируемых образцов меда.

Дата добавления: 2015-05-29