Определение Vibrio parahaemolyticus (галофильный вибрион)

Определение коагулазоположительного стафилококка.

Стерильно готовят 10% взвесь исходного материала в РПБ с 6,5% хлористого натрия. Посев термостатируют 24 часа при температуре 37⁰С. После термостатирования материал высевают биологической петлей на МСА и ЖСА. Посевы проращивают при температуре 37⁰С 48 часов. Патогенные стафилококки на желточно-солевом агаре образуют вокруг колоний зону плотного коагулянта – «радужный венчик» (лецитинвителазная реакция). Из колоний, окрашенных в золотисто-желтый, лимонный, фарфорово-белый цвета делают мазки и окрашивают по Граму. При обнаружении в мазках Грамположительных стафилококков, культуру отсевают на косой РПА и инкубируют при 37⁰С 18-24 часа.

Одновременно с окраской по Граму определяют способность культуры образовывать каталазу. На колонию наносят 3% раствор перекиси водорода и прикрывают стерильным покровным стеклом. Стафилококки имеют положительную реакцию на каталазу: они расщепляют перекись водорода на воду и атомарный кислород, который хорошо виден под стеклом в виде пузырьков.

С чистым материалом со скошенного агара выполняют реакцию плазмокоагуляции: в пробирку с 0,5 мл стерильной плазмы крови кролика вносят 1 петлю чистой культуры стафилококка, одну пробирку оставляют для контроля. Посевы термостатируют при37⁰С 3-6 часов, если плазма не свернулась за 6 часов, пробирки оставляют на 24 часа при комнатной температуре. Если плазма свернется, реакция считается положительной, а стафилококк – патогенным. (Скоагулированная плазма не выпадает из пробирки при переворачивании).

Галофильные вибрионы в зависимости от биологического типа встречаются на рыбе, моллюсках, ракообразных, выделяются из организма людей, больных кишечными заболеваниями (биотип 1). В морской воде этот биотип нее встречается. Биотип 2 обнаруживается в основном в морской воде. Представителем патогенных галофильных вибрионов является Vibrio parahaemolyticus. Эта бактерия имеет вид прямых или слегка изогнутых палочек, могут встречаться шаровидные формы, а в некоторых случаях образуются скопления и нити. Бактерии грамотрицательные, спор и капсул не образуют, очень подвижные монотрихи. Вибрионы разжижают желатин, расщепляют глюкозу, маннит с образованием кислоты, но без газа, образуют индол, оксидазоположительные, реакция Фогес-Проскауэра вариабельна. Сероводород не образуют, размножаются в пределах рН от 6 до 10.

Отравление Vibrio parahaemolyticus наступает при употреблении в пищу продуктов, содержащих 10⁶ кл/г и больше.

Выявление Vibrio parahaemolyticus. Для анализа используют 10%-ю взвесь продукта. Определение вибрионов включает следующие этапы: посев исследуемой взвеси на пластинку ДДА (дифференциально-диагностический агар) в чашке Петри при помощи шпателя Дригальского и в пептонную воду с 5% NaCl. Посевы инкубируют при температуре 37º С в течение 24 часов. На темно-зеленом фоне среды ДДА вибрион дает плосковыпуклые полупрозрачные голубоватые колонии правильной круглой формы с ровными краями, влажной гладкой блестящей поверхностью, от 1 до 5 мм в диаметре.

Подрощенный материал с пептонной воды также высевают при помощи шпателя Дригальского на ДДА и термостатируют. При наличии Vibrio parahaemolyticus получают рост аналогичных колоний. Из подозрительных колоний делают мазки и окрашивают по Граму. При наличии бактерий, соответствующих по морфологии Vibrio parahaemolyticus, определяют подвижность бактерий, их отношение к углеводам, проводят оксидазный тест, тесты на наличие сероводорода и индола, разжижение желатина. По полученным результатам идентифицируют выделенную форму.

Дата добавления: 2015-07-02