Выделение Listeria monocytogenes

Выделение Bacillus cereus

Эта бацилла широко распространена в природе, она встречается в почве, воде, довольно часто обнаруживается в различных пищевых продуктах, особенно в фаршевых изделиях.

Bacillus cereus представляет собой крупные Грамположительные палочки с закругленными концами, подвижна, образует центральные споры, споры не термостойкие. В препаратах бактерия располагается в виде цепочек или штакетообразных скоплений. Бацилла аэробна, расщепляет глюкозу с образованием кислоты без газа; маннит, арабинозу, крахмал и казеин не расщепляет. Способна развиваться в среде с содержанием NaCl до 15 %. Образует лецитиназу, ацетилметилкарбинол.

Выявление Bacillus cereus.

Для выявления Bacillus cereus делают посев 0,1 мл исходного 10%-й взвеси исследуемого материала шпателем Дригальского на поверхность застывшего полимиксинового агара с ТТХ (трифенилтетразолийхлоридом), посев инкубируют при температуре 29º С от 1 до 4 суток. На этой среде Bacillus cereus образует распластанные по поверхности ярко-рубиновые колонии, окруженные широкой зоной белого матового коагулята, образовавшегося вследствие разложения лецитина. Из характерных колоний делают мазки и окрашивают по Граму. При обнаружении характерных бактерий определяют их подвижность, проводят посевы на дифференциально-диагностические среды для определения способности бактерии ферментировать глюкозу и арабинозу, на кровяной агар для выявления способности гемолизировать эритроциты (Bacillus cereus вызывает гемолиз эритроцитов). При совпадении признаков выделенную бактерию считают Bacillus cereus и учитывают численность бактерии в 1 грамме продукта. Если их содержание превышает 10⁵ кл/г, продукт может представлять потенциальную опасность пищевого отравления.

Листерии представляют собой короткие Грамположительные палочки, спор не образуют, подвижны при 22º С, неподвижны – при 37º С, каталазоположительные, расщепляют ксилозу, иногда – рамнозу с образованием кислоты без газа. Маннит не ферментируют, капсул не образуют, индол не образуют, желатин и мочевину не расщепляют, аэробы. Развиваются в диапазоне температур от –1,5º до 44º С и в диапазоне рН от 4,4 до 11. Обнаруживается у 37 видов млекопитающих, домашних и диких грызунов, 17 видов птиц, рыб, крабов, моллюсков, мух, клещей, слепней. Выживает и размножается в пресной и морской воде, почве, на рыбном сырье, отходах переработки рыбы, на инвентаре, в полостях, где они образуют микроколонии, покрытые дополнительной оболочкой-биопленкой, поэтому не удаляются при обычной санитарной обработке.

Выделение Listeria monocytogenes. навеску исследуемого материала массой 25 грамм вносят в селективную питательную среду для обогащения: бульон Фрайзера, среду ПБЛ (питательный бульон для листерий). Соотношение продукта и среды 1:9. Посевы термостатируют при 37º С 24 часа. При росте листерии на средах, содержащих эскулин и цитрат железа аммонийного, наблюдается почернение среды. После термостатирования 0,1 мл суспензии пересевают в 10 мл бульона для вторичного обогащения для листерий. Посевы термостатируют 48 часов при температуре 37º С. В средах с эскулином отмечают почернение. Из пробирок после термостатирования независимо от наличия или отсутствия роста делают посев по 0,1 мл на поверхность двух чашек Петри на агар для идентификации листерий (ПАЛКАМ-агар) и среду для определения лецитиназной активности листерий. Посевы термостатируют при температуре 37º С 24-48 часов. На среде Палкам листерии образуют мелкие серовато-зеленые или оливково-зеленые колонии с черным ореолом, иногда с черным центром диаметром от 0,5 до 1 мм. Через 48 часов колонии диаметром 1-2 мм приобретают зеленую окраску с углубленными центрами, окруженными черным ореолом.

Идентификация Listeria monocytogenes. Для определения принадлежности выделенных бактерий к роду Listeria полученные культуры окрашивают по Граму, определяют наличие у них каталазы, способность к ферментации маннита, ставят реакцию нитратредукции.

Обнаружение в посевах грамположительных коротких тонких палочек, каталазоположительных, не восстанавливающих нитраты, не расщепляющих маннит, подвижных при 25 С, и неподвижных при 37 С, указывает на принадлежность выделенных культур к Listeria monocytogenes.

Листерии вызывают у людей три варианта заболеваний: железистую форму, нервную форму и септическую форму. Для возникновения заболевания у чувствительных людей достаточно дозы 100 клеток листерий.

4.3.1.10. Выявление дрожжей и плесневых грибов (ГОСТ 10444.12-88)

Из подготовленной пробы продукта и его разведения 1 мл материала высевают в 2 чашки Петри, посевы заливают питательной средой Сабуро. Посевы термостатируют 5 суток при температуре 24 С.

Развитие дрожжей на агаризованных средах сопровождается образованием крупных выпуклых блестящих серовато-белых, белых, розовых колоний с гладким ровным краем. Плесневые грибы дают на средах пушистые, волокнистые колонии, окрашенные в разные цвета. Микроскопические грибы определяют в живой культуре по определителю микроскопических грибов.

Дата добавления: 2015-07-02