Работа 26. Фосфопротеиды

ХОД РАБОТЫ.

1. Кислотный гидролиз простого белка. Для гидролиза отмеривают в круглодонную колбу 20 мл раствора яичного белка и 5 мл концентрированной соляной кислоты. Колбочку закрывают пробкой с длинной стеклянной трубкой и закрепляют на штативе с асбестовой сеткой. Содержимое колбы кипятят под тягой в течение 45 мин.

2. Открытие промежуточных продуктов распада белка в гидролизате при помощи биуретовой реакции. В процессе гидролиза проделывают биуретовую реакцию (см. Работу 1) с несколькими каплями предварительно нейтрализованного гидролизата. Промежуточные продукты распада белка – пептоны – при проведении биуретовой реакции дают розовое или красное окрашивание, а белки – сине-фиолетовое.

Фосфопротеиды представляют собой сложные белки, состоящие из простого белка и небелковой части – фосфорной кислоты. Фосфорная кислота связана с белком через гидроксильную группу оксиаминокислот – серина и треонина. К этой группе белков относятся казеиноген молока, виттелин яичного желтка, ихтулин икры и некоторые другие. Фосфопротеиды служат одним из питательных материалов для развития эмбрионов.

Исследуемый материал: молоко.

Реактивы: концентрированная СН₃СООН, 1% раствор CuSO₄, 10% раствор NaOH, 10% раствор НNO₃, фенолфталеин, молибденовый реактив.

Оборудование: воронки, фильтры, пробирки, стеклянная палочка, пипетки, спиртовка.

ХОД РАБОТЫ. Выделение казеина из молока описано в работе 5 (Раздел 2).

1. Гидролиз казеина. В пробирку помещают выделенный из молока казеин и приливают 2 мл 10% раствора едкого натра. Кипятят 10-15 мин на асбестовой сетке с обратным холодильником, затем охлаждают пробирку и проводят реакцию на продукты гидролиза.

2. Обнаружение белка. Белок обнаруживают биуретовой реакцией. В пробирку к 3 каплям гидролизата добавляют 1 каплю 1% раствора сернокислой меди. Появляется розо-фиолетовое окрашивание.

3. Обнаружение фосфата. Оставшийся гидролизат подкисляют несколькими каплями 10% раствора азотной кислоты в присутствии 1-2 капель фенолфталеина до обесцвечивания и отфильтровывают в сухую пробирку. К 5 каплям фильтрата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят несколько минут. Жидкость окрашивается в желтый цвет, а затем при охлаждении выпадает желтый осадок фосфорно-молибденового аммония, указывающий на присутствие фосфата в гидролизате.

Работа 27. Гликопротеиды. Открытие углеводного компонента в яичном белке.

Гликопротеиды – сложные белки, в простетические группы которых входят углеводы и их производные. Гликопротеиды содержатся почти во всех тканях и жидкостях организма, носят общее название муцинов и мукоидов и выполняют опорную и защитную функции.

Исследуемый материал: яичный белок.

Реактивы: концентрированная H₂SO₄, 1% раствор тимола, концентрированная CH₃COOH.

Оборудование: пробирки, капельницы.

При взаимодействии концентрированной серной кислоты с гексозами или пентозами происходит дегидратация их: из пентоз образуется фурфурол, а из гексоз – оксиметилфурфурол. Они дают с тимолом или a-нафтолом в присутствии концентрированной серной кислоты продукты конденсации красного цвета. К 10 каплям профильтрованного гидролизата добавляют 2-3 капли 1% раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно наслаивают 20 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется красное окрашивание вследствие образования продукта конденсации фурфурола с тимолом.

Оформление. Результаты работ по сложным белкам оформить в таблицу.

Дата добавления: 2015-07-02