Работа 31. Влияние рН на активность амилазы слюны

Влияние рН на скорость ферментативных реакций

Влияние температуры на активность амилазы слюны

Работа 30. Влияние температуры на активность амилазы слюны

Влияние температуры на скорость ферментативной реакции

Скорость ферментативных реакций, как и неферментативных, увеличивается при повышении температуры. Но в связи с белковой природой ферментов, повышение температуры может привести к их денатурации и снижению скорости реакции. Денатурация тем значительнее, чем выше температура и чем больше время инкубации.

Исследуемый материал: слюна.

Реактивы: 1%-ный раствор крахмала, реактив Люголя, дистиллированная вода.

Оборудование: пипетки, пробирки, термостат, спиртовка, ледяная баня, предметные стекла.

ХОД РАБОТЫ. Наливают в 4 пробирки по 0,5 мл крахмала. Еще в 4 пробирки наливают по 0,5 мл разбавленной (1:5) слюны. Берут первую пару пробирок (одна с ферментом, другая – с крахмалом) и помещают в баню со льдом. Вторую пару оставляют при комнатной температуре. Третью пару пробирок помещают в термостат (37˚С), а четвертую – в кипящую водяную баню. Через 5 минут содержимое каждой пары пробирок сливают вместе, тщательно перемешивают и оставляют стоять еще 10 мин при тех же условиях. Из третьей пробирки отливают 3 капли жидкости и проделывают реакцию с каплей йода на стекле. Если появляется синее окрашивание, растворы оставляют стоять еще 10 мин и после этого повторяют реакцию с йодом на стекле. После этого добавляют по 2 капли реактива Люголя во все пробирки и наблюдают за развитием окраски.

Оформление работы. Результаты записывают в таблицу. Делают выводы о характере влияния температуры на активность амилазы.

№ пробирки	Температура инкубации, ˚С	Окрашивание с йодом

Все ферменты проявляют максимальную активность при определенном оптимальном значении рН. Ниже и выше оптимума рН наблюдается снижение активности ферментов. Зависимость активности от рН объясняется влиянием на степень ионизации ионогенных групп фермента, а также субстрата.

Оптимум рН для действия амилазы слюны можно определить при взаимодействии ее с крахмалом при различных значениях рН среды. О степени расщепления крахмала можно судит по реакции крахмала с раствором йода. При оптимальном значении рН расщепление крахмала произойдет полностью (окраска с йодом отсутствует). По мере удаления от оптимума рН в кислую или щелочную зоны расщепление крахмала произойдет только частично до стадии декстринов или крахмал вообще не подвергнется расщеплению.

Исследуемый материал: слюна

Реактивы: 1%-ный раствор крахмала, реактив Люголя, 1/15М растворы фосфатного буфера с разными значениями рН (5,5-8,0).

Оборудование: пробирки, пипетки, термостат.

ХОД РАБОТЫ. Наливают в 4 пробирки по 0,5 мл крахмала, 0,5 мл разбавленной (1:5) слюны. Затем в первую пробирку добавляют 0,5 мл буфера с рН 5,8, во вторую пробирку – 0,5 мл буфера с рН 6,5, в третью – 0,5 мл буфера с рН 7,0, и в четвертую – 0,5 мл буфера с рН 8,0. Помещают все пробирки на 10 мин в термостат (37˚С). После этого добавляют по 2 капли реактива Люголя во все пробирки и наблюдают за развитием окраски.

Оформление работы. Результаты записывают в таблицу. Делают выводы о характере влияния рН на активность амилазы.

Дата добавления: 2015-07-02