Работа 33. Специфичность действия сахаразы

Специфичность действия ферментов

Влияние рН на активность амилазы слюны

№ пробирки	РН	Окрашивание с йодом
	5,5
	6,5
	7,0
	8,0

Специфичность действия выражается в способности ферментов катализировать реакции одного стереоизомера, одного определенного субстрата или группы сходных по строению субстратов, характеризующихся определенным типом химической связи или наличием определенной химической группировки. Это свойство является наиболее важным среди свойств биологических катализаторов. Оно обусловлено наличием в молекуле фермента активного центра, ответственного за каталитическую активность, формирование которого происходит под влиянием субстрата в момент взаимодействия. Специфичность действия в работе изучается на примере α-амилазы слюны и сахаразы, полученной из дрожжей.

Работа 32. Специфичность действия α-амилазы слюны

α-амилаза катализирует гидролитическое расщепление крахмала с образованием мальтозы. Промежуточными продуктами в данной реакции являются различные декстрины (амино-, эритро-, ахро-, мальтодекстрины). Степень гидролиза крахмала можно контролировать по цветной реакции с йодом. Крахмал дает с йодом синее окрашивание, декстрины в зависимости от размеров молекул окрашиваются с йодом в разные цвета (сине-фиолетовый, красно-бурый, желто-бурый), а конечные продукты с йодом окраски не дают. Второй контрольной пробой может быть реакция на наличие свободных альдегидных групп.

Исследуемый материал: слюна

Реактивы: 1%-ный раствор крахмала, 1%-ный раствор сахарозы, 10%-ный раствор NaOH, 1%-нвй раствор CuSO₄, реактив Люголя, дистиллированная вода.

Оборудование: пробирки, пипетки, термостат.

ХОД РАБОТЫ. Готовят 2 инкубационные пробы, как указано в таблице, используя в качестве субстратов для амилазы 2 вещества – крахмал и сахарозу.

№ пробы	Амилаза слюны (мл)	Крахмал (мл)	Сахароза (мл)	Реакция Троммера (+, -)	Реакция с йодом (+,-)

Пробы выдерживают в термостате 15 мин при 37˚С. Затем с первой пробой проделывают 2 реакции: Троммера и реакцию с йодом. Со второй пробой проделывают реакцию Троммера.

Оформление работы. Вносят в таблицу результаты реакций. Делают вывод о специфичности амилазы.

Сахараза катализирует расщепление сахарозы с образованием глюкозы и фруктозы. Действие сахаразы можно обнаружить по появлению в инкубационной среде свободной глюкозы, дающей положительную реакцию Троммера вследствие наличия в молекуле глюкозы свободного полуацетального альдегида. Сахароза не обладает восстанавливающими свойствами.

Исследуемый материал: препарат сахаразы.

Реактивы: 1%-ный раствор крахмала, 1%-ный раствор сахарозы, 10%-ный раствор NaOH, 1%-нвй раствор CuSO₄, реактив Люголя, дистиллированная вода.

Оборудование: пробирки, пипетки, термостат

ХОД РАБОТЫ. Готовят 2 инкубационные пробы, как указано в таблице, используя в качестве субстратов для сахаразы 2 вещества – крахмал и сахарозу.

№ пробы	Сахараза (мл)	Крахмал (мл)	Сахароза (мл)	Реакция Троммера (+, -)	Реакция с йодом (+,-)

Пробы выдерживают в термостате 15 мин при 37˚С. Затем со второй пробой проделывают 2 реакции: Троммера и реакцию с йодом. С первой пробой проделывают реакцию Троммера.

Оформление работы. Вносят в таблицу результаты реакций. Делают вывод о специфичности сахаразы.

Дата добавления: 2015-07-02