Работа 29. Количественное определение аскорбиновой кислоты

Биологическая роль аскорбиновой кислоты в организме разнообразна. Она принимает участие в окислительно-восстановительных процессах и связана с системой глютатиона. Аскорбиновая кислота участвует в синтезе стероидных гормонов в коре надпочечников и необходима для процесса гидроксилирования как фактор для проявления действия ферментов гидроксилаз. Она участвует в образовании тетрагидрофолиевой кислоты из фолиевой кислоты, в гидроксилировании лизина в оксилизин, пролина в оксипролин, необходимых для образования коллагеновых волокон; ускоряет всасывание железа, активирует фермент желудочного сока пепсиноген, что особенно важно при недостатке соляной кислоты в желудочном соке.

Принцип метода. Количественный метод определения аскорбиновой кислоты основан на способности витамина С восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенол, который в кислой среде имеет красную окраску, в щелочной – синюю, а при восстановлении обесцвечивается.

Для предохранения витамина С от разрушения исследуемый раствор титруют в кислой среде щелочным раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления розового окрашивания.

Исследуемый материал: хвоя, капуста, морковь, картофель, моча.

Реактивы: 0,001 н раствор натриевой соли 2,6-дихлорфенолиндофенола, 10% раствор НСl.

Оборудование: весы аптечные; мерные цилиндры; пипетки на 1, 2, 5 мл; фарфоровые ступки с пестиками; бюретка; колбочки для титрования; ножницы; скальпель; стеклянный песок.

ХОД РАБОТЫ. 1. Определение содержания витамина С в капусте. Отвешивают 1 г капусты, растирают в ступке с 2 мл 10% раствора НСl и стеклянным песком, приливают 8 мл воды и фильтруют. Отбирают для титрования 2 мл фильтрата, добавляют 10 капель 10% раствора НСl и титруют 2,6-дихлорфенолиндофенолом до розовой окраски. Вычисляют содержание аскорбиновой кислоты в 100 г капусты.

Для расчета содержания аскорбиновой кислоты используют формулу:

0,088 · А · Г · 100

х =

Б · В,

где х – содержание аскорбиновой кислоты в миллиграммах на 100 г продукта, 0,088 – содержание аскорбиновой кислоты, мг, А – количество титранта, мл, Б – объем экстракта, взятый для титрования, мл, В – количество продукта, взятое для анализа, г, Г – общее количество экстракта, 100 – пересчет на 100 г продукта.

В 100 г капусты содержится 25-100 мг аскорбиновой кислоты, в 100 г шиповника – 500-1500 мг, в 100 г хвои – 200-400 мг.

2. Определение содержания витамина С в картофеле. Отвешивают 5 г картофеля, растирают в ступке со стеклянным песком и 20 каплями 10% раствора НСl (чтобы картофель не темнел). Постепенно приливают 15 мл дистиллированной воды. Полученную массу сливают в стаканчик, ополаскивают ступку 2 мл воды, сливают воду в колбочку и титруют 2,6-дихлорфенолиндофенолом до розовой окраски. Рассчитывают содержание аскорбиновой кислоты. В 100 г картофеля содержится 1-5 мг витамина С.

3. Определение содержания витамина С в моче. Определение содержания витамина С в моче дает представление о запасах этого витамина в организме, так как наблюдается соответствие между концентрацией витамина С в крови и количеством этого витамина, выделяемым с мочой. Однако при гиповитаминозе С содержание аскорбиновой кислоты в моче не всегда понижено. Часто оно бывает нормальным, несмотря на большой недостаток этого витамина в тканях.

У здоровых людей введение per os 100 мг витамина С быстро приводит к повышению его концентрации в крови и моче. При гиповитаминозе С ткани, испытывающие недостаток в витамине, задерживают принятый витамин и его концентрация в моче не повышается. Моча здорового человека содержит 20-30 мг витамина С или 113,55-170,33 мкмоль/сут. У детей уровень этого витамина понижается при цинге, а также острых и хронических инфекционных заболеваниях.

В стаканчик или колбочку отмеривают 10 мл мочи и 10 мл дистиллированной воды, перемешивают, подкисляют 20 каплями 10% раствора НСL и титруют 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолом до розовой окраски. Расчет содержания аскорбиновой кислоты в моче производят по формуле:

0,088 · А · В

х =

Б,

где х – содержание аскорбиновой кислоты, мг/сут, 0,088 – коэффициент, мг, А – количество титранта, мл, Б – объем мочи, взятой для титрования, мл, В – среднее суточное количество мочи (для мужчин – 1500 мл, для женщин – 1200 мл).

Контрольные вопросы

1. Что такое витамины?

2. Каково химическое строение и биологическая роль витаминов В₁, В₂, В₆, В₁₂, РР, Н, С, Р, пантотеновой кислоты?

3. Коферментом каких ферментов является витамин В₁? В₂? В₆? В₁₂? РР? Н? С?

Раздел 6. Ферменты

Ферменты – биологические катализаторы белковой природы. Они присутствуют во всех тканях, клетках, внутриклеточных органеллах и биологических жидкостях. Благодаря ферментам обмен веществ в живых организмах протекает с большой скоростью при температуре тела и без участия сильнодействующих химических реагентов.

Ферменты как катализаторы: 1) не вызывают каких-либо реакций, невозможных по термодинамическим законам; 2) увеличивают скорость как прямой, так и обратной реакции обратимого химического процесса; 3) остаются химически неизменными; 4) в очень малых количествах способны превращать несоизмеримо большие массы субстратов.

Согласно современным представлениям ферменты увеличивают скорость химической реакции, снижая энергетический барьер данной реакции. Ведущую роль в механизме ферментативного катализа играют промежуточные фермент-субстратные комплексы, образование которых определяется тонкой структурой активного центра и уникальной структурой всей молекулы фермента.

Ферменты делят на простые и сложные. У простых ферментов функции контактных и каталитических групп активного центра определяются только радикалами аминокислотных остатков, у сложных ферментов активный центр включает также коферменты и ионы металлов.

Дата добавления: 2015-07-02