Ход работы

Определение активности аспатратаминотрансферазы (АСТ).

Лабораторная работа (определение активности трансаминаз)

Аудиторная работа.

Процесс переаминирования (трансаминирования), то есть перенос ами­но­группы катализируют ферменты с общим наименованием трансаминазы. Трансаминирование наиболее интенсивно протекает в печени, мышцах, сердце и семенниках. Активность трансаминаз в сыворотке крови – дополнительный, но существенный элемент диагностики некоторых заболеваний: при повреждении отдельных органов, содержащиеся в их тканях трансаминазы поступают в кровоток с интенсивностью, более высокой, чем в условиях нормы. В силу этого трансаминазная активность крови увеличивается (например, при инфаркте миокарда, вирусном гепатите, циррозе печени, раковом поражении печени).

1. Приготовить субстратный раствор: 29,2 мг ά-кетоглутаровой кислоты и 2,66 аспарагина растворить в 1 н растворе NaOH, добавляя его малыми порциями до pH = 7,4, затем раствор перелить в мерную колбу на 100 мл и довести до метки 0,1 М фосфатным буферным раствором с pH = 7,4 (добавление 1 капли хлороформа позволяет хранить в рефрижераторе).

2. 0,1 мл сыворотки крови смешать с 0,5 мл нагретого до 37ºС субстратного раствора, инкубировать 60 мин при 37ºС; прибавить 0,5 мл динитрофенилгидразинового реактива и экспонировать 15 мин при комнатной температуре. Прибавить 5 мл 0,4 N раствора NaOH и через 20 мин колориметрировать против контроля (кювета – 10 мм, фильтр зеленый). Контроль – те же реактивы + 0,1 мл H₂O. Определить активность по таблице.

Таблица для вычисления активности АСТ

Экстинкция	Е по Врублевскому	IE
0,020 0,040 0,060 0,080 0,100 0,120 0,140 0,160 0,180 0,200 0,220 0,240 0,260

Выполнить предложенные действия ли ответить на вопросы::

1. Назвать пути использования аминокислот в организме.

2. Назвать важнейшие индукторы и ингибиторы биосинтеза белка.

3. Назвать пути превращения аминокислот, не используемых в биосинтезах.

4. Изобразить структурными формулами процесс окислительного дез­амии­нирования аланина.

5. Нарисовать схему переаминирования глутамина и пировиноградной кис­­лоты.

6. Нарисовать схему взаимосвязи переаминирования и дезаминирования.

7. Назвать важнейшие реакции переаминирования.

8. Назвать ферменты трансаминирования и кофермент трансаминаз.

9. Почему при усиленном распаде аминокислот вследствие энергетического голодания ускоряется накопление кетоновых тел?

10. Назвать пути обезвреживания аммиака.

11. В каких тканях протекает образование глутамина и аспарагина?

12. Где и как образуются аммонийные соли?

13. Записать последовательность реакций орнитинового цикла.

14. Показать химизм образование биологически активных аминов (ГАМК, гистамина, серотонина, дофамина, норадреналина)

15. Назвать виды нарушений обмена аминокислот.

16. Назвать причины важнейших наследственных нарушений обмена аминокислот и (фенилкетонурии, алкаптонурии, цистинурии, цистиноза).

Решить следующие задачи:

1. При дезаминироании аланина образуется пировиноградная кислота.

Каков энергетический эффект полного окисления (в молях АТФ на моль кислоты)?

2. Известно, что потребление 1 г белка сопровождается образованием 0,16 г азота в форме мочевины. Энерготраты пациента составляют 3500 ккал в сутки, выделение мочевины - 20 г за сутки. Определить долю белка в энерготратах (калорийность белка - 4,1 ккал/ г).

3. Глутаминовая кислота в процессе окислительного дезаминирования превращается в α-кетоглутаровую. Рассчитать энергетический эффект полного окисления 1 М глутаминовой кислоты (в молях АТФ).

4. При инкубации с переживающей тканью печени аспарагиновой кислоты, содержащей радиоизотоп углерода в α-положении, в составе какого соединения обнаружится радиометка (другими словами, в состав какого соединения войдет α-углеродный атом)?

ЗАНЯТИЕ 22 («Обмен сложных белков»)

Цель занятия: усвоить, какие ферменты, и в какой последовательности обеспечивают переваривание ДНК и РНК, в каких тканях и из каких пред­шественников они синтезируются; усвоить схему метаболизм гема - его биосинтез и распад, а также то, что нарушения метаболизма гема, пуриновых и пиримидиновых оснований возникают при нарушении функций определенных ферментов, и что эти нарушения могут быть приобретенными и наследуемыми.

Студент должен знать:

1. Ферменты, участвующие в переваривании нуклеопротеидов;

2. В каких тканях, и из каких предшественников синтезируется пуриновый скелет и пиримидиновое ядро;

3. Как протекает катаболизм пуриновых и пирамидиновых оснований и пути удаления конечных продуктов;

4. Нарушение обмена пуриновых и пиримидиновых оснований;

5. Биосинтез глобина, гема и гемоглобина, нарушения синтеза, последствия;

6. Распад гема, конечный продукт распада, пути его устранения, нарушения билирубина.

Студент должен уметь:

1. Написать схему переваривания нуклеопротеидов;

2. Изобразить структурными формулами биосинтез пиримидинового ядра,

3. Показать на структурной формуле пуринового скелета его предшественники;

4. Написать структурными формулами катаболизм пиримидиновых и пуриновых оснований;

5. Назвать факторы, обусловливающие нарушения обмена пуриновых и пиримидиновых оснований;

6. Назвать этапы синтеза гема и ферменты процесса;

7. Нарисовать схему превращения билирубина, причину возникновения и виды желтух;

8. Провести определение билирубина в сыворотке крови и мурексидную пробу.

Студент должен получить представление:

1. О патологических состояниях, сопровождающихся нарушением метаболизма пуриновых и пиримидиновых оснований,

2. О патологических процессах, ведущих к билирубинемиям.

Сведения из базыовых дисциплин, необходимые для изучения темы:

Строение сложных белков (нуклеопротеинов, хромопротеинов), аминокислот, мочевины, простетические группы сложных белков (ДНК, РНК, гем).

Дата добавления: 2015-08-31