Инфекция, вызванная пастереллами 9 страница

Прямая иммунофлюоресценция. В большинстве случаев забо­левание сифилисом диагностируется в приемных частных врачей, но тем или иным причинам не применяющих исследование в темном ноле зрения, и это вызва­ло необходимость в разработке альтернативных методов идентификации трепонем в экссудате.

Применяемый в центральных лабораториях тест прямой иммунофлюоресценции антител (DFA-TR) основан на использовании конъюгированных с флюоресцеином поликлональных антител для выявления Т. pallidum в фиксированных мазках, приготовленных из магериала, полученного из подозрительных на сифи­лис очагов. Наличие антител, перекрестно реагирующих с санрофитирующимн непатогенными спирохетами и окрашивающих их, обусловливает тщательную абсорбцию антисыворотки с использованием истинного возбудителя в целях получения специфического реагента.

Разработана усовершенствованная техника реакции прямой иммунофлюоресценции, при которой используются моноклональные антитела, специфичные только в отношении патогенных спирохет. В клинических испытаниях этой мето­дики было показано, что она также чувствительна и специфична, как и исследова­ние в темном поле.

Выявление Т. раllidum в тканях. При наличии клинических или гистологических признаков, позволяющих заподозрить диагноз сифилиса, для его подтверждения часто возникает необходимость выявить Т. pallidum в тканях. Хотя микроорганизм сравнительно легко может выявляться методом серебрения, результаты следует оценивать с осторожностью, так. как часто выявляются артефакты. Более достоверным считается обнаружение трепонем в тканях с по­мощью моноклональных или поликлональных антител к бледной трепонеме.

Серологическая диагностика сифилиса. Многообразие се­рологических реакций для диагностики сифилиса приводит к ненужным затруд­нениям. Сифилитическая инфекция вызывает образование двух типов антител, неспецифических реагиновых антител и специфических антитрепонемных анти­тел, которые определяются с помощью тестов, направленных соответственно на выявление нетренонемных н трепонемных компонентов (табл. 122-1). Как те, так и другие тесты используются у лиц с любой инфекцией, вызванной трепонемами, будь то фрамбезия, пинта или эндемический сифилис.

Нетрепонемные антитела, образующиеся при сифилисе, содержат IgG- и IgM-иммуноглобулины, направленные против липоидного антигена, образую­щегося при взаимодействии Т. pallidum с тканями макроорганизма, и, вероятно, против липоидного антигена самой Т. pallidum. Термин «реагин» неудачен, так как не имеющие к нему отношения антитела IgE, участвующие в некоторых аллергических феноменах, также известны как реагины.

Наиболее широко применяемыми лабораторными тестами для выявления нетрепонемных, или реагиновых, антител являются ускоренный тест выявления реагинов в плазме (RPR), который может быть автоматизирован (ART), и VDRL-тест на стекле (названный так но названию лаборатории Venereal Disease Research Laboratory, предложившей его н разработавшей специальный антиген—прим. пере в.). Другими менее распространенными тестами для выявления нетрепонемных антител являются тест определения неподогретых сывороточных реагинов (USR) и тест скрининга реагинов (RST). В этих тестах антитела выявляются на основании микроскопической (VDRL, USR) или макро­скопической (RPR, RST) флоккуляции суспензии антигена (см. табл. 122-1)

Тест RPR более дорогостоящ, чем тест VDRL, но проще в выполнении и не требует подогрева сыворотки. Он является методом выбора при необходимости срочной постановки диагноза в клинических или амбулаторных условиях. Реаген­ты для теста VDRL значительно дешевле, но их необходимо готовить ежедневно. Хотя для замены VDRL-теста разработаны более простые макроскопические методы, в частности RPR-исследование сыворотки, используемое во многих лабораториях, VDRL-тест остается стандартным для исследования спинномозговой жидкости.

RPR- и VDRL-тесты одинаково чувствительны и могут использоваться для начального скринннга или количественного определения титра сывороточны\ реагиновых антител. Титр реагиновых антител отражает активность процессу: при нрогрессировании первичного сифилиса может наблюдаться четырехкратное или более увеличение титра реагиновых антител; титры, определяемые с помощью VDRL, как правило, составляют 1:32 и выше при вторичном сифилисе; перси ггирующее снижение титра после лечения раннего сифилиса является важным доказательством эффективности терапии. Титры, установленные с помощью RPR, не коррелируют полностью с титрами VDRL, и при последующем количественном определении титров (для оценки эффективности проводимого лечения) следует пользоваться каким-либо одним тестом.

Для выявления специфических антител против трепонем существуют три стандартных метода: реакция абсорбции флюоресцирующих антител к трепонемам (FTA-ABS), реакция микрогемагглютинации для выявления антител к Т. pallidum (МНА-ТР) н реакция гемагглютннации трепонем на сифилис (HATTS). Последний гемагглютинационный тест широко используется в Канаде и в Европе, но не получил распространения в Соединенных Штатах Америки.

Для постановки реакции FTA-ABS сыворотка больного предварительно разводится с субстанцией, содержащей антигены непатогенных спирохет (сор­бент) для того, чтобы связать групповые антитела, которые могут образовывать­ся в организме в ответ на вегетирование в нем оральных или генитальных спирохет — сапрофитов. Затем абсорбированная сыворотка больного помещается на стекло, на котором фиксирована Т. pallidum. Если в сыворотке больного присутствуют специфические антитела к возбудителю сифилиса, они связываются с высушенными фиксированными спирохетами, а затем выявляются при добавле­нии меченного флюоресцеином античеловеческого гамма-глобулина и последую­щем исследовании препарата методом флюоресцентной микроскопии. В реакциях гемагглютинации Т. pallidum (МНА-ТР, НАТТ, и ТРНА) также используются сорбентоподобные разведения для связывания групповых антител к спирохетам. Специфические антитела к возбудителю сифилиса выявляются с помощью агглю­тинации покрытых Т. pallidum бараньих или индюшиных эритроцитов. Наиболее специфичным лабораторным тестом является тест иммобилизации возбудителя, при котором иммобилизация живых Т. pallidum осуществляется с помощью им­мунной сыворотки и комплемента. Однако эта реакция весьма трудоемка, а пото­му в США она используется только в научно-исследовательских лабораториях. Обе реакции -— гемагглютинации и FTA-ABS — очень специфичны и в случае применения их для подтверждения положительных результатов реагинового теста высокоэффективны для диагностики сифилиса. Однако даже эти реакции могут давать от 1 до 2% ложноположитсльных результатов при массовых скрининговых обследованиях населения.

Относительная чувствительность реакций VDRL, FTA-ABS и МНА-ТР на различных стадиях течения сифилитической инфекции отражена в табл. 122-2. Нетрепонемные реакции оказываются неэффективными примерно у 30% больных первичным или поздним сифилисом. На ранних стадиях первичного сифилиса максимального выявления антител можно добиться, либо применяя тест FTA-ABS, либо просто повторяя реакцию VRDL через каждые 1--2 нед, если резуль­таты первичной постановки этой реакции были отрицательными. Однако резуль­татов одного реагинового теста недостаточно при подозрении на поздний симпто­матический сифилис, в этом случае следует использовать более чувствительный FTA-ABS-тест. При первичном сифилисе реакции гемагглютинации оказываются даже менее чувствительными, чем реагиновые тесты, но при других стадиях забо­левания они так же чувствительны, как FTA-ABS. При вторичном сифилисе все нетрепонемные н трепонемные реакции достаточно чувствительны, и отрицатель­ный их результат фактически исключает диагноз сифилиса у больного с наличием подозрительных очагов на коже и слизистых оболочках (необходимо учитывать, что 1—2% больных вторичным сифилисом не реагируют или слабо реагируют в реакции VDRL с неразведенной сывороткой; при более высоких разведениях можно получить положительный результат—феномен проагглютинационной зоны — прозоны).

Ложноположительные серологические реакции на сифилис. Так как антиген, используемый в нетрепонемных реакциях, обна­руживается в других тканях, тесты могут давать положительные результаты у лиц, не имеющих трепонемной инфекции, хотя титр в этом случае редко превы­шает 1:8. Установлено, что среди лиц, положительно реагировавших на реагиновые тесты, от 20 до 40% дают ложноположительные реакции, однако этот про

Таблица 122-1. Серологическая диагностика сифилиса

Дата добавления: 2014-11-20