Обнаружение полисахаридов в лекарственном растительном сырье

Гистохимические реакции

Физико-химические свойства полисахаридов

Полисахариды - аморфные, реже кристаллические вещества от серо­вато-желтоватого до буроватого цвета, практически без запаха, вкус - с ощущением слизистости, иногда - сладковатый. Полисахариды нерастворимы в спирте и неполярных органических растворителях, растворимость в воде варьирует: некоторые линейные гомополисахариды (ксиланы. целлюлоза, маннаны) в воде не растворяются из-за прочных межмолекулярных связей; сложные и разветвленные полисахариды либо растворяются в воде (гликоген, декстраны). либо образуют гели (пектины, агар-агар, альгиновые кислоты). Различная растворимость в воде и спирте используется в качественном и количественном анализе. Полисахариды подвергаются кислотном) или ферментативному гидролизу с образованием моно- или олигосахаридов. Полисахариды не обладают воссанавливающими свойствами.

1. Реактивы на слизь:

- метиленовый синий (окрашивает слизь в голубой цвет);

- раствор NaOH, КОН (лимонно-желтое окрашивание);

- раствор черной туши в воде (1:10) (на темно-сером (почти черном)
фоне частички слизи выделяются в виде белых островков).

2. Реактивы на целлюлозу:

- хлор-цинк-йод (сине-фиолетовое окрашивание);

- йод с серной кислотой (синее окрашивание);

- раствор Люголя (желтое окрашивание).

3. Реактивы на крахмал:

- раствор йода окрашивает крахмал в синий цвет.

4. Реактивы на инулин:

- спиртовый (15-20%) раствор а-нафтола или тимола (реактив Молиша) с инулином дает розово-фиолетовое окрашивание (а-нафтол) или красное (тимол).

I. Осаждение полисахаридов этанолом

Обнаружение полисахаридов в лекарственном растительном сырье проводят путем осаждения их этанолом. Для этого к концентрированным водным извлечениям прибавляют трехкратный объем 96% этилового спирта, что приводит к выпадению рыхлых осадков. Полученные осадки отделяют, промывают спиртом и высушивают. Водные растворы осадков используют для проведения реакций с реактивом Фелинга и раствором меди сульфата. Положительные реакции свидетельствуют о наличии в сырье полисахаридов.

П. Хроматографический анализ

Метод хроматографии широко используется для анализа моносахаридного состава полисахаридов и включает в себя несколько стадий:

1. Экстракция полисахаридов из сырья.сырья соответствующими экстрагентами при комнатной температуре или при нагревании:

- водой (для водорастворимых полисахаридов),

- водными растворами органических или минеральных кислот (смесь
0.5% растворов щавелевой кислоты и оксалата аммония 1:1- для пектино­вых веществ),

- водными растворами КОН, NaOH (7-15% - для гемицеллюлоз).

2. Выделение полисахаридов.

Проводится путем осаждения полисахаридов из концентрированных извлечений этиловым спиртом.

3. Гидролиз полисахаридов.

Для расщепления полисахаридов до моносахаридов используют гидролиз серной кислотой (1 моль/л) при 100°С в течение 6 часов (для водорастворимых полисахаридов) и 24 часов (для пектиновых веществ).

4. Анализ гидролизатов.

Определение количественного содержания полисахаридов в сырье

Определение количественного содержания полисахаридов в лекарственном растительном сырье включает следующие этапы:

1.Экстракция полисахаридов их сырья;

2.Собственно количественное определение полисахаридов.

Для количественного определения полисахаридов используются следующие методы:

1. Гравиметрический

Этот метод основан на извлечении полисахаридов из сырья, их оса­ждении и последующем определении массы полуденного осадка.

В фармакопейном анализе гравиметрически определяют содержание полисахаридов в листьях подорожника большого, в траве череды трехраздельной, в слоевищах ламинарии [ГФ XI, вып. 2].

Различные группы полисахаридов имеют индивидуальное отношение к различным реагентам, предложенным для их осаждения. В качестве осадителей чаще всего используют 96% этанол, реже - 20% раствор свинца ацетата, раствор хлорида окисного железа.

2. Спектрофотометрический метод

Основан на измерении оптической плотности продуктов взаимодей­ствия моносахаридов, образовавшихся после гидролиза полисахаридов, с пикриновой кислотой в щелочной среде. Этот метод не является фармакопейным, однако, разработаны и предложены методики спектрофотометрического определения полисахаридов для некоторых видов сырья (листья мать-и-мачехи, цветки липы сердцевидной, цветки василька синего и др.), а также в сухой слизи алтея.

Для оценки количественного содержания инулина в сырье девясила высокого разработана методика спектрофотометрического определения, основанная на измерении оптической плотности продуктов взаимодействия фруктозы, образовавшейся после расщепления инулина, с резорцином в кислой среде.

Для стандартизации корня одуванчика разработана методика прямого спектрофотометрического определения фруктозанов после их ки­слотной трансформации, основанной на способности сахаров (фруктозы, сахарозы) при нагревании с концентрированными кислотами образовывать продукты, имеющие поглощение в области 200-380 нм.

3. Титрометрический метод

Такой способ качественной и количественной оценки выделенной из растений полисахаридной фракции предложен по реакции образования комплекса полисахаридов с йодом (обратное йодиметрическое титрование) и опробован для водорастворимых полисахаридов подорожника и мать-и-мачехи.

Потенциометрическое титрование используется для определения пектиновых веществ.

4. Иммуноферментный анализ по реакции антиген-антитело. Метод позволяет не только оценить количество субстанции, но и ее иммунную активность, т.е. биологическое действие. Такой метод разработан для определения иммуноактивных полисахаридной и гликопротеиновой фракции в экстрактах эхинацеи пурпурной.

Дата добавления: 2014-12-27