Биохимическое исследование крови

Биохимическое исследование крови рептилий в последние годы стало обычным во многих лабораториях, имеющих биохимические анализаторы. Здесь, впрочем, существуют те же ограничения, о которых речь шла при обсуждении других методов лабораторных исследований. Биохимический профиль подвержен индивидуальным и сезонным вариациям, и может иметь существенные видоспецифические различия. Поэтому, опять же, проводя биохимическое исследование образца крови, взятого от больной ящерицы, лаборатория должна иметь для сравнения либо «нормы», установленные самостоятельно, либо кровь от клинически здоровой ящерицы того же вида. Методики исследования и качество реактивов могут существенно влиять на конечный результат. Лучше всего, разумеется, брать кровь непосредственно в лаборатории и сразу ее исследовать. Так как это не всегда возможно, кровь нужно отцентрифугировать сразу после взятия, и посылать в лабораторию плазму или сыворотку, замороженную при –20^оС, а лучше на сухом льду. Не следует посылать в лабораторию цельную кровь, даже с антикоагулянтом. До сих пор продолжаются дискуссии, какой материал лучше исследовать – плазму или сыворотку. Общепринятое мнение, что лучше плазму. В плазме более достоверно определяется общий белок и А/Г-индекс. Однако, для получения плазмы необходимо добавить антикоагулянт – чаще всего добавляют литиевый или натриевый гепарин. Это, в свою очередь, вызывает ложное понижение концентрации общего кальция крови, причем довольно значительное. Так, наши исследования показывают, что при использовании отечественного натриевого гепарина, эта погрешность составляет почти 1 ммоль/л, но даже при использовании литиевого гепарина погрешность может составлять до 0,4 ммоль/л (Васильев, 2002). Учитывая, что нижняя граница нормы общего кальция у игуан составляет около 2 ммоль/л, такая погрешность достаточна для постановки ложного диагноза. В связи с этим мы предпочитаем работать с сывороткой, если необходимо установить «почечные» параметры (кальций, фосфор, общий белок, мочевую кислоту) или с плазмой, если нас интересуют «печеночные» параметры (трансаминазы, ЛДГ, КФК, ГГТ). Если же мы планируем проводить электрофорез плазмы, то в качестве антикоагулянта используется ЭДТА. Данные Finkelstein, et al (2003), специально сравнивавших результаты парных биохимических исследований сыворотки и плазмы крови игуан показали, что, хотя при этом имеются достоверные различия, они не настолько значительны, чтобы повлиять на постановку диагноза. По их данным в плазме крови игуан уровни общего белка, альбуминов, глобулинов и АСТ были более высокими, а в сыворотке был выше уровень АЛТ. При сравнении парных образцов плазмы и сыворотки от обыкновенных удавов, в сыворотке был выше уровень КФК. Авторы полагают, что выбор образца не принципиален для биохимического исследования, за исключением того, что из одинакового объема крови получается больше плазмы, чем сыворотки. Поэтому у мелких или ослабленных ящериц из образца крови лучше сепарировать плазму. Уровень некоторых биохимических показателей особенно зависим от всевозможных артефактов. Можно выделить несколько главных.

- Гемолиз возникает при стоянии цельной крови или использовании тонких игл и сильного давления при переливании крови в пробирки и вакутайнеры. По данным Benson, et al (1999) умеренный гемолиз крови, взятой от здоровых игуан, вызывал значительное повышение уровня фосфора. Сильный гемолиз вызывал повышение уровней фосфора, калия, общего белка и АСТ. Как это ни странно, уровень кальция, мочевой кислоты и КФК не изменялся. Это конфликтует с данными других исследований (Mader, Rosental, 1998), показывающих, что в крови в случае гемолиза уровень КФК может повышаться почти в 10 раз, а также существенно понижается уровень кальция (в 1,5 раза) и глюкозы (в 2 раза). Наши данные лучше соотносятся с результатами последних авторов. Так или иначе, если после центрифугирования сыворотка или плазма имеет красноватый оттенок, такой образец лучше вообще не использовать или исключить из протокола исследований перечисленные выше параметры.

- При грубо выполненной венепункции в образце повышаются уровни АСТ, КФК и мочевой кислоты из-за сильного загрязнения тканевой жидкостью. Уровень КФК может также значительно возрастать, если кровь берут в конце осмотра после болезненных манипуляций или продолжительной фиксации пациента.

- Разбавление крови лимфой при слепой венепункции вызывает снижение общего белка, гематокрита и количества эритроцитов. Чаще всего это происходит при пункции венозных синусов (копчикового и постзатылочного) и вен плеча и голени из расположенных поблизости крупных лимфатических резервуаров. При этом при аспирации в шприц сначала втягивается прозрачная жидкость.

- Замораживание быстро сепарированной плазмы или сыворотки даже при –15 – 20°С не приводит, по нашим данным, к существенным артефактам.

Таким образом, большинство артефактов вызывает ложное повышение уровней фосфора, мочевой кислоты и КФК, а также ложное понижение общего кальция. Выраженные артефакты искусственно увеличивают уровень калия – в итоге мы можем наблюдать ложный биохимический профиль, характеризующий патологию почек. На это нужно делать скидку, считая кальций в анализе несколько более высоким, а фосфор – низким. Интерпретировать повышенные значения КФК вообще нужно с большой осторожностью. Любой анализ, вызывающий у врача сомнение, лучше повторить через 2-3 дня. Не раз в нашей практике КФК, повышенная до 3-5 тыс. ЕД/мкл, через 2 дня давала вполне умеренный уровень.

Наиболее распространенные методы определения общего кальция крови в клинической лабораторной практике – абсорбционная спектрофотометрия и колориметрические методы с о-крезолфталеином или arsenazo III. С помощью этих методов невозможно отделить связанный кальций от общего. Соответственно, при обычном биохимическом исследовании определяется только общий кальций в сыворотке (или плазме) крови. Так как уровень общего кальция в большой степени зависит от его связанной с белками фракции, для коррекции данных предложено несколько формул, учитывающих влияние альбуминовой фракции и общего белка на результаты исследований. Например, для собак принята формула:

Коррекция кальция = Общий Са (мг/дл) – альбумины (г/дл) + 3,5

Мы не обнаружили корреляций с этой формулой при исследовании крови игуан, однако, в принципе, построить уравнение регрессии не сложно, имея около 200 измерений свободного и связанного кальция крови.

Более стабильна и менее зависима от артефактов фракция свободного ионизированного кальция. Собственно, именно она является биологически активной и более ценной с позиций клинической диагностики. Для определения ионизированной фракции требуются специальные методы взятия и исследования материала. Для того чтобы уменьшить ошибку, вызванную артефактами, кровь берут в анаэробных условиях и охлаждают до +4°С, после чего применяют селективные для ионов кальция электроды. У теплокровных животных факторы, влияющие на уровень белка, не влияют на ионизированный кальций. В медицинской практике тест на ионизированный кальций является рутинным методом и возможно, врачам, работающим с рептилиями, лучше договариваться с медицинскими лабораториями. В США фирма HESKA продает стандартные панели (i-STAT, Waukesha, WI 53188) для определения газов крови, КЩС и ионизированного кальция по цене 10$ за панель. Они пригодны даже для «домашнего» использования. Сейчас с ними работают врачи в полевых условиях. Поскольку пока они адаптированы только для проведения исследований у человека и нескольких видов домашних животных, их применение для рептилий и интерпретация результатов требует осторожности и больше первичной информации.

Биохимический профиль интерпретируется у ящериц также как и у других животных. Клиническое значение биохимических показателей обсуждается в разделах, посвященных диагностике конкретных заболеваний. Поэтому в данном разделе будут просто приведены значения основных биохимических показателей крови игуан, основанные на данных разных авторов и результатах собственных исследований (см. таблицу).

Таблица.. Нормальные биохимические показатели крови игуан (по данным разных авторов и на основании собственных исследований).

Показатель	♂♂	♀♀	По нашим данным
Натрий (ммоль/л)	159±4,7	161,2±4,3	152-164
Калий (ммоль/л)	4,2±1,1	3,3±1,2	2,5-4,2
Хлор (ммоль/л)	120±4	119±3	120-130
Кальций (мг/дл) (ммоль/л)	11,2±1,1 2,79±0,27	12±0,7 2,99 ± 0,17	7,21-13,23 1,8-3,3
Фосфор (мг/дл) (ммоль/л)	6,1±1,7 1,97± 0,55	7,3±1,5 2,36± 0,48	4,65-8,36 1,5-2,7
Мочевая кислота (мг/дл) (ммоль/л)	2,2±0,8 130±47	4,3±2,3 256±137	0,49-3,19 29-190
Креатинин (мг/дл) (мкмоль/л)	0,4±0,2 35±17,6	0,3±0,2 26,5±17,6	0,1-0,25 9-22
Азот мочевины, BUN (мг/дл) Мочевина (ммоль/л)	0,5±0,4 0,38±0,3	0,6±0,1 0,46±0,08	0,26-6,58 0,2-5
Глюкоза (мг/дл)	159,5±38,6 8,85±2,14	152,6±31,6 8,47±1,75	143-219,8 7,94-12,2
Общий белок (г/дл)	5,2±0,9	6,5±0,5	3,2-6,6
Альбумины (г/дл)	1,7±0,3	2,2±0,3	1,8-3,5
Глобулины (г/дл)	3,5±0,7	4,3±0,5	3,2-5,5
А/Г-индекс	0,5±0,1	0,5±0,1	0,5-0,9
Холестерол (мг/дл)	171,5±47,5 4,43±1,23	262,5±38,1 6,79±0,99	96,65-193,3 2,5-5,0
Триглицериды (ммоль/л)	-	-	1,0-1,8
ЛДГ (ЕД/л)	-	-	12-1800
АЛТ (ЕД/л)	37,4±29,4	44,1±32,7	5-30
АСТ (ЕД/л)	39,5±16,3	50,1±39,5	5-52
ГГТ (ЕД/л)	-	-	0-0,3
ЩФ (ЕД/л)	44,7±24,3	55,6±20,3	22-180
Общий билирубин (мг/дл)	1,1±0,8 18,8±13,68	1,3±1,3 22,23±22,23	-
КФК (ЕД/л)	-	-	88-1245
Желчные кислоты (мкмоль/л)	Голодные: 7,5	Сытые: 32-33	-
Т3 (пкг/дл)	-	-	42-53
Т4 (мкг/дл)	-	-	1,9-2,3

Дата добавления: 2015-03-29