Экспериментальный

2.1. Реагенты и образцы

Рибофлавин (> 99,5%) получали от Serva (Heidel-

Берг, Германия) нингидрина (> 99%) и кофеина (> 99%) с

Fluka (Buchs, Switzerland), таурин (> 99%) и никотинамид

(> 99,5%) от Merck (Дармштадт, Германия) и pyridox-

ине гидрохлорид (> 98%) от Sigma (Steinheim, Германия).

Хлороформ,2-пропанол, этанол, метанол, ацетон, уксусную кислоту,

муравьиной кислоты и аммиака (25%), все приобретено у Merck,

были качества ВЭЖХ или дистиллированную перед его использованием. Ultrapure

водой (18 м / см

) Был произведен Синергия системы (Mil-

lipore GmbH, Schwalbach, Германия). Хроматографии

проводили на силикагеле 60 F

ВЭТСХ стекла поддерживаемых пластин

от Merck, 20 х 10 см, 200 м в толщину. Энергии

напитки и другие напитки были куплены на местном

рынка.

2.2. Стандартные решения и производных

Два мг рибофлавина, 25 мг никотинамида, 15 мг

ofpyridoxineand20 mgofcaffeineandtaurinewereweightedin

A100 mLvolumetricflaskandfilledupto100 mLwithultra-чистой

воды. Решение хранить в холодильнике в защищенном от света

по крайней мере стабильны в течение 10 дней. Как производных решения (для

погружение) 0,3 г нингидрина растворяли в 100 мл 2-пропанола

и уксусной кислоты в соотношении 95:5 (объем / объем).

2.3. Подготовка образцов

Образцы дегазируют в течение 20 мин в ультразвуковой ванне.

Для количественного определения B

, В

, Никотинамид и кофеин SAM-

Плес были переданы флаконе сэмплер янтаря и непосредственно использовать

для хроматографии. Для анализа таурин, 2 мл образца

разводили в 25 мл метанола и воды 7:3 (объем / объем).

2.4. Хроматография

ВЭТСХ Планшеты промывали (пре-хроматографии) с

метанолом и сушат в течение 15 мин при 120

◦

С. Образец и стандарт

решения были реализованы при Автоматический пробоотборник TLC 4 (ATS

4, CAMAG Muttenz, Швейцария), используя следующие настройки:

Группа длина 6 мм, расстояние от левого края пластины 10 мм и от

нижний край пластины 10 мм, в результате чего 21 треков на пластине,

Дозировка скоростью 120 л / с, поскольку объемы пример приложения 10 л

в витамине

, В

и B

, 2,5 л кофеина и 1 л в течение

таурин, как стандартные объемы приложения 1-5 L.

Хроматографии проводили в 20 см × 10 см двойной

через камеру (CAMAG) до миграции расстоянии 80 мм

(От нижнего края пластины) с использованием смеси хлороформа

этанола, уксусной кислоты, ацетона и воды 54:27:10:2:2 (об / об) в качестве

подвижной фазы. Затем пластину сушили в течение 3 мин в потоке

теплого воздуха. Дополнительно хроматография может быть выполнена

Разработка автоматизированной палаты (ADC2, CAMAG).

УФ-и видимой на месте спектры были записаны с помощью ТСХ

Сканер 3 (CAMAG) и флуоресценции в растворе с использованием

Fluoromax-2 спектрофлуориметре от Jobin Ивон-Spex

(Нью-Джерси, США). Multi-длина волны обнаружение проводили методом тонкослойной хроматографии

Сканер 3 с прорезью размеры 4 мм × 0,2 мм и сканирование

Нин скоростью 100 мм / сек. В УФ-поглощения режиме, никотинамид

измеряли при 261 нм и кофеина при 275 нм, в флуоресценции

Режим, рибофлавина и пиридоксина сканировали при 366 /> 400 нм

and313 /> 340 нм, respectivelyandinVis-absorbancemode, тау-

Рине был обнаружен при 525 нм, после пост-хроматографического производные

тования нингидрином решения с использованием устройств TLC Погружение

(CAMAG) с погружением скоростью 3,5 см / с и погружений

Сион время 1 с и нагревают на ТСХ пластины нагревателя (CAMAG) для

2 мин при 100

◦

C.

Все инструменты были управлять с помощью программной платформы

winCats 1.4.1 планарной хроматографии Manager (CAMAG).

Статистический анализ проводили с GraphPad Prism 4.0

КСМ 2,1 и программного обеспечения.

2.5. Масс-спектрометрия

После сканирования пластина, положение каждого соединения был

отмечены. Использование насоса ВЭЖХ (HP 1100, Agilent тех-

гии, Пало-Альто, США) и интерфейс от ChromeXtrakt

Хроман (Holzhausen, Германия) ВЭТСХ тарелка была кон-

подключенного к VG Platform II одной квадрупольного масс-спектрометра

метр от Micromass (Манчестер, Великобритания). Соединения были

онлайн элюируют из слоя смесью метанола и

формиат буфера (10 ммолей / л, рН 4,0), 95:5 (объем / объем) при скорости потока

0,1 мл / мин. Система MS работала в режиме сканирования с

следующие параметры для ESI

+

: Температура источника 120

◦

С,

капиллярные напряжения 3,5 кВ, ВЛ 0,5 кВ линзы, конус напряжение 55 V,

время задержки 0,5 с, в задержки в канале 0,02, повторяется 1, пролет 0,5,

за исключением записи рибофлавин, для которых уксусную кислоту и воду

1:09 (об / об) использовали в качестве элюирующего растворителя и как капиллярный и конус

напряжение 3,25 кВ и 60 В соответственно. Для ESI

-

: Источник температуры

Page 3

М. Аранда, Г. Morlock / J. Chromatogr. 1131 (2006) 253-260

perature120

◦

C, capillaryvoltage-3.5 кВ, HVlens0.5 кВ, конус

Напряжение -55 В, время выдержки 0,5 с, в канале задержки 0,02, повторяется

1, пролет 0,5. Данные были обработаны с массовой Lynx 3,2 программного обеспечения.

Дата добавления: 2015-05-09