Результаты и обсуждение

Добыча и очистка образца

Концентрации целевых соединений в безалкогольных напитках

, как правило, ниже, чем предел обнаружения большинства методов.

Таким образом, процедура обогащения не обойтись. Наиболее

часто используется HLB и C18 картриджи были изучены в этом

Метод. HLB картриджей при условии удовлетворительного восстановления

BPA, но для восстановления ОП и НП были ниже, чем

60%. Низкое возмещение ОП и НП на картриджах HLB

Сообщалось также о других авторов (Beck и соавт. 2005;

Carabias-Мартинес и др.. 2004; Жано и соавт. 2002). C18

картриджи предоставляется гораздо лучше для восстановления ОП и НП

чем HLB картриджей. Однако следует отметить, что

исключительно элюированием полярный метанол или раствор этилацетата

не могли получить хорошее восстановление для ОП и НП. Менее полярные

решения, такие как н-гексан или дихлорметан решение

следует наносить на достаточном элюирование из них, в то время

для BPA, метанол или этилацетат было достаточно для

элюирования. Наконец, 5 мл н-гексана и 5 мл метанола были

используются последовательно для элюирования целевого соединения из C18

картриджей. Результаты были удовлетворял возмещения

выше, чем 82% для всех трех веществ.

Оптимизация параметров Дериватизация

Влияние рН на Дериватизация

Буферные растворы и их значения рН играет важную роль

В предколонки производных. Дериватизация Ана-

электролитов с BCEC-Cl проводили в бикарбонат натрия

буферного раствора. Влияние рН на дериватизации были

Затем исследовали с помощью бикарбоната натрия буфера (0,1 моль

L

-1

) В диапазоне рН 8.0-11. Максимальная дериватизация

выходы были получены в диапазоне рН 9,5-10,5. Поэтому

0,1 М натрий-бикарбонатного буфера с рН 10 был применен

для всех последующих дериватизации.

Влияние BCEC-Cl Концентрация на Дериватизация

Концентрация дериватизирующие реагента является жизненно важным фактором

В предколонки производных. Она должна быть достаточной

для завершения реакции аналитов. Тем не менее, мас-

Sive превышение дериватизирующие реагент не является хорошим выбором. Это

не только трата реагента, но также может привести к перегрузке

из детектора. Эффекты BCEC-Cl концентрации в

диапазоне от 1,0 · 10

-4

-2,0 × 10

-3

Молл

-1

Были исследованы

в этой статье. Результаты показали, что полное derivatiza-

ции может быть достигнуто, когда BCEC-Cl концентрации

составляла 1,0 × 10

-3

Молл

-1

. Увеличение избытка BCEC-Cl

пределы этого уровня не было никаких улучшений по выходам

производных.

Рис. 1 дериватизация

Схема BCEC-Cl с BPA,

OP, Н. П.

Анальный питания. Методика

Page 4

Влияние температуры реакции на Дериватизация

Полного модифицирования BCEC-Cl с ОП и НП мог

быть достигнута в течение 3 мин при комнатной температуре. Однако

дериватизация BPAwas не достаточно при этом условии

так как это было два фенольных гидроксильных групп, которые могут реагировать

с BCEC-Cl. Влияние температуры реакции на фтор-

Интенсивность флуоресценции производных BPA были протестированы в течение

диапазон температур 20-80 ° С. Результаты показали, что

полного модифицирования может быть достигнута при 50 ° С в течение

5 мин. Когда температуру повышают до 60 ° С, не при-

шение или снижение ответа не наблюдалось. Однако

когда температура была выше, чем 70 ° С, очевидные

уменьшаться в ответ наблюдался. Это следует отнести

с тем, что высокие температуры приводит к гидролизу

производных в основном состоянии. На основании этих результатов, производные

тования проводили при 50 ° С в течение 5 мин при рН 10.

Разделение ВЭЖХ

Полное разделение ВЭЖХ производных может быть

достигнуто на Hypersil BDS С8 колонке в сочетании

с градиентным элюированием смесью воды и ацетонитрила в качестве подвижной

фазы. Три производные разделяли в 11 мин

с хорошим разрешением базовой линии. Дериватизация увеличился

гидрофобность аналитов и сделал их в элюироваться

увеличилось время удерживания (см. рис. 2). Так как большинство

помех в напиток образцов гидрофильных и Элюированную

рано, целевые соединения с повышенной гидрофобностью

Поэтому были сдвинуты из шумы, которые часто были

Рис. 2 Хроматограммы BPA, О. П. и Н. П. производным от стандартного производные BPA, О. П. и Н. П. б образцов колы и С пьют чай

Анальный питания. Методика

Страница 5

найти в анализе ВЭЖХ. Как видно из рис. 2, Есть

много интерференционных максимумов элюируется перед BPA, в то время мало

помехи пики наблюдаются после элюирования БФА.

Метод проверки

Линейность, повторяемость и воспроизводимость

Линейные регрессии площади пика по сравнению с концентрациями

были установлены в диапазоне концентраций от 1.0-200.0 μgL

-1

для BPA и 2.0-200.0 μgL

-1

для ОП и НП. Каждый стандарт

калибровочной кривой состоял из пяти пунктов и было сделано на

В тот же день мягких анализ образцов напитка. Хорошая линейность

было получено для всех аналитов коэффициент корреляции

циенты> 0,996. Для анализа повторяемости, пять воспроизводит

в концентрации 1,0 μgL

-1

(20 μgL

-1

В окончательном решении

из-за коэффициента метод концентрации 20) были

проанализированы в тот же день (п 05) тем же аналитиком. Для

воспроизводимость анализа, пять повторов 1,0 μgL

-1

были

проанализирована на трех разных дней различными аналитиками.

относительное стандартное отклонение (РВД), полученный в повторяемости

анализ были меньше, чем 8,0%, а RSDs, полученные в

воспроизводимость анализа были меньше, чем 10%, что указывает

хорошую точность и надежность предлагаемого метода.

Чувствительность, точность и стабильность

Предел обнаружения (УД) и пределы количественного

(LOQs), рассчитанные на отношение сигнал-шум (S / N), равное 3, и

10, соответственно, были использованы для оценки чувствительности

предлагаемого метода. Когда 20 мл напитка образца Ана-

Проанализированы, LODs для BPA, О. П. и Н. П. были 0,02, 0,03, и

0,03 μgL

-1

Соответственно. Соответствующее LOQs были

0,06, 0,1 и 0,1 μgL

-1

Соответственно. Точность (оценивается

на восстановление) измеряли путем анализа пяти шипами SAM-

цов на трех уровнях (0,5, 1,0 и 5,0 μgL

-1

). Хорошую степень

точность была достигнута аналитов с восстановлений

в пределах от 82 до 94% (табл. 1).

Стабильность BCEC-Cl и аналита производные было

также проверены. Раствора безводного ацетонитрила BCEC-Cl

можно хранить при температуре 4 ° С в течение 1 недели без явного снижения

В производных дает для целевых соединений по сравнению

для тех, кто впервые подготовлена ​​BCEC-Cl решение. Примеры производных

tives держали в автоматический пробоотборник и неоднократно проанализированы

на 0, 4, 8, 12, 24 и 48 ч соответственно. Относительная

стандартных отклонений Площади пиков <3,2%. Поэтому

Таблица 1 Восстановление и относительное стандартное отклонение целевой ком-

фунтов в безалкогольных напитках (N 05)

Аналит

Шипованная уровне

(ΜgL

-1

)

Определенный

уровне (μgL

-1

)

Восстановление

(%)

RSD (%)

BPA

0,50

0,46

9,6

1,0

0,93

8,2

5,0

4,7

7,6

OP

0,50

0,43

8,8

1,0

0,92

7,5

5,0

4,5

6,8

NP

0,50

0,41

8,2

1,0

0,84

7,0

5,0

4,2

6,4

Рис. 3 Сравнение HPLC хроматограммы аналитов получены FL детектора. Хроматограмма BCEC-Cl производные аналитов (10,

20 и 20 μgL

-1

для BPA, О. П. и Н. П.,), б хроматограмме аналитов без производных (1000 μgL

-1

)

Анальный питания. Методика

Page 6

можно сделать вывод, что стабильность BCEC-Cl производные

подходит для хроматографического анализа.

Усиление сигнала

Содержащие бензольное кольцо, BPA, OP, Н. П. может быть определена

добывают методом прямого ВЭЖХ с ультрафиолетовым (УФ) или фтор-

флуоресценции обнаружения (Флорида). Однако чувствительность была

относительно низким. Например, методы ВЭЖХ с прямой ФЗ

(Garcia-Прието и соавт. 2008) и УФ-детекция (Yoshida и соавт.

2001) был применен к анализу BPA в консервах

овощи и фрукты с количественной пределах 9 μgkg

-1

и 5 μgL

-1

Соответственно. Количественное пределы

выше два методы ВЭЖХ значительно выше, чем 0,06 мкг

L

-1

этого метода. Эффект усиления сигнала был также

изображен путем сравнения хроматограммой BPA О.П., и

NP производные, полученные в этом методе с полученным

Прямой метод ВЭЖХ с FL обнаружения. Как показано на рис. 3,

BPA элюировали при повышенной времени, и его чувствительность

повышена примерно на два порядка по сравнению

что без производных. Кроме того, чувствительность этого

Метод также сравнивали с некоторым чувствительным ГХ-МС и

LC-MS методы сообщалось ранее (см. таблицу 2). Несмотря на то,

Предлагаемый способ проводили с помощью ВЭЖХ, чувствительность

Этот метод был равен или превосходит многие ГХ-МС и

LC-MS методы сообщалось ранее. Исключение наблюдалось

для ОП, чьи ПКО получены с помощью ГХ-МС была в три раза

ниже, чем этот метод. ГХ-МС показал отличные свойства в

алкилфенолам анализа. Мы считаем, что является причиной, почему GC-

MS предпочитают многие исследователи в анализе явлений

nolic соединений. Слабая чувствительность ЖХ-МС методов

может быть частично связано с низкой эффективностью ионизации

этих соединений в MS ионизационной камеры (Higashi и

Шимады 2004; Л.И. и др.. 2005; Сальвадора и соавт. 2007).

Применение

Разработанный метод был успешно применен к де-

прекращение BPA, О. П. и Н. П. в безалкогольных напитках. Рисунок 2

показаны хроматограммы образца кола и чай пить

Образец, полученный этим методом. БФА был обнаружен в шести

Образцы в концентрациях от 0,10 до 0,86 мкг

L

-1

; ОП можно найти только в одном образце с концентрацией

0,25 μgL

-1

, В то время NP была обнаружена в двух образцах

концентрации ниже 0,22 μgL

-1

. Их концентрации

обобщены в таблице 3. Концентрация бисфенола в

мягких продуктов напитка значительно ниже, чем сообщалось в

молока или мяса образцов (Chen и соавт. 2010; Феррер и соавт. 2011;

Лин и др.. 2009; Maragou соавт. 2006) И аналогичные

Исследование, проведенное Цао и др.. (2009) в Канаде безалкогольных напитков

рынка. Если взрослого человека (60 кг массы тела) потребляется 500 мл

безалкогольного напитка в день, рацион BPA будет меньше

чем 0,0072 μgkg

-1

массы тела в день на основе

высокий уровень BPA в безалкогольных напитках (0,86 μgL

-1

), Что значительно ниже

чем предварительной TDI 50 μgkg

-1

массы тела в

дня, установленного EPA.

Выводы

Высокочувствительных и селективных метод ВЭЖХ с флуоресценции

флуоресценции обнаружения была разработана для определения БФА

ОП и НП в безалкогольных напитках. Чувствительность ВЭЖХ был значительно

увеличивается за счет введения BCEC-Cl с превосходными

свойством флуоресценции в молекулы аналита.

Дериватизация также увеличили гидрофобность Ана-

электролитов и, следовательно, мало помех наблюдались в

ВЭЖХ хроматограмме. Достоинства высокой чувствительности и мало

Таблица 2 Сравнение

Методы, используемые, прежде чем

Предлагаемый метод

- Не включены в методе

Ссылка

Метод

Образец

ПКО (μgL

-1

)

Тип

Количество

OP

NP

BPA

Лин и др.. (2009)

ГХ-МС

Молоко

20 г

0,03

1,0

-

Цао и др.. (2008)

ГХ-МС

Детская смесь

6 г

-

-

0,5

Schmitz-Афонсу соавт. (2003)

ЖХ-МС

Яйцо

5 г

-

Maragou соавт. (2006)

ЖХ-МС

Молоко

1 г

-

-

В этой статье

ВЭЖХ

Безалкогольный напиток

20 мл

0,1

0,1

0,06

Таблица 3 Концентрация BPA, О. П. и Н. П. в мягких образцов напитка (N 03)

Мягкий продукт напиток

BPA (μgL

-1

)

OP (μgL

-1

)

NP (μgL

-1

)

Cola

0,86

й

й

Cola B

0,58

0,25

0,22

Cola C

0,12

й

й

Энергетический напиток

0,16

й

0,14

Энергетический напиток B

й

й

й

Чайный напиток

0.10

й

й

Чайный напиток B

0,60

й

й

Чайный напиток C

й

й

й

й не обнаруживается, <LOD

Анальный питания. Методика

Page 7

помех, создаваемых дериватизацией BCEC-Cl различать-

чаются предлагаемого метода из многочисленных методов

дело с BPA, О. П. и Н. П. в пьяном виде образцов.

Дата добавления: 2015-05-09