Результаты и обсуждение. Несмотря на различные методы ТСХ, опубликовано около опре-

Несмотря на различные методы ТСХ, опубликовано около опре-

делению Витамин B [48-50], кофеин [24,51,52] й таурин

[32,33] и поют различные виды плит и градиенты, этот метод

предлагает изократического разделения для всех пяти соединений одновременно-

менно на простой пластине с силикагелем, используя обычные реактивы.

Focuswaslaidondevelopmentofahigh-throughputmethodthat

могут быть применены в любой лаборатории с основным оборудованием TLC.

Этот метод позволил несколько обнаружение пяти соединений

После одного хроматографического процесса, и это также оказалось

селективные и устойчива к помехам углеводы, которые

находятся на высоком уровне в таких напитках. На втором этапе,

надежность ВЭТСХ / ESI-MS для подтверждения результатов

впервые было показано для этих соединений.

3.1. Мобильная этап оптимизации и выбора длины волны

Несколько смеси растворителей для одного или нескольких разделения

В-комплекс витаминов, как описано в литературе [16,53] были

исследованы для оценки расстояния между витаминами и

Кроме того кофеин и таурин. Удовлетворительное разделение было

не получена с любым из подвижных фаз описано выше. Использование

систематическое мобильного этап оптимизации [54], смесь

хлороформ, этанол, уксусная кислота, ацетон и воду 54:27:10:2:2

(Объем / объем) был выбран. В решение максимально поглощения волн

Длины описано для рибофлавин, пиридоксин, никотинамид и

кофеина, 275, 290, 260 и 274 нм соответственно [6,55]; на

пластины оптимальный длин волн получены спектры записи

ния были сходны, т.е. 272, 296, 261 и 275 нм соответственно

(Рис. 1). Рибофлавина и пиридоксина были также обнаружены в

Решение с помощью флуоресцентного измерения с использованием главным образом λ

бывший

и 295 нм при λ

EM

524 и 395 нм соответственно [12,56].

На плитах силикагеля сигнала флуоресценции рибофлавина под

UV 366 /> 400 нм была превосходной. Тем не менее, не мог пиридоксин

обнаружить, как описано в литературе. Таким образом, с spectroflu-

orimeter, диапазоны возбуждения и длины волны излучения были

установлено, что от 310 до 350 нм и от 390 до 440 нм,

соответственно. Следовательно, Светлая линия энергии на 313 нм Мер-

паров ртути лампы и отсечения фильтра 340 нм были выбраны для

пиридоксин измерение флуоресценции на ВЭТСХ пластины. В

При таурин, длины волны максимального поглощения после

дериватизация было сообщено на 490 [32] 513-й нм [33] D -epend

мости от производных условиях. В этой работе, оптимальное

Длина волны Полученный 525 нм (Рис. 1).

3.2. Утверждение

3.2.1. Аналитические ответ

Для каждого соединения в соответствии с рекомендациями Международной

Комитет по гармонизации (ICH) [57], калибровка

создана в течение пяти анализируемого вещества в трех экземплярах, применяя раз-

Рис. 1. UV / Vis спектров поглощения получают после хроматографии на силикагеле 60 F

ВЭТСХ-пластинах.

Page 4

М. Аранда, Г. Morlock / J. Chromatogr. 1131 (2006) 253-260

Таблица 1

Полиномиальное калибровки по площади пика (пяти анализируемого вещества в трех экземплярах)

Соединения

Range (нг / диапазон)

Уравнение (у = ах

+ BX + C)

95% доверительными интервалами

R

B

C

Рибофлавин

21.0-105.0

у = -0,3663 х

+ 214,60 х - 59.05

-0,45660 -0,27600 К

203.00-226.20

-378.70-260.60

0.9999

Никотинамид

249.2-1246.0

у = -0,0010 х

+ 7,73 + 90,49 х

-0,00199 До -0,000005

6.21-9.24

-405.50-586.50

0,9998

Кофеин

201.8-1009.0

у = -0,0051 х

+ 18,01 х - 174,60

-0,00676 -0,00348 К

15.99-20.04

-710.40-361.20

0.9999

Таурин

199.0-995.0

у = -0,0028 х

+ 8,86 х + 709,40

-0,00429 -0,00124 К

7.01-10.72

224.30-1194.00

0,9996

Таблица 2

Линейная калибровка по площади пика (пять анализируемого вещества в трех экземплярах)

Соединение

Range (нг / диапазон)

Уравнение

(Y = BX + C)

95% доверительными интервалами

R

B

C

Пиридоксин

149.8-748.9

у = (27,77 ± 0,15) х - (713,40 ± 72,83)

27.31-28.34

-945,10 -481,60 К

0.9999

Склон ± стандартное отклонение и перехват ± стандартное отклонение.

ferent объемы стандартного раствора. Калибровка участков

показал, линейной или полиномиальной регрессии с определением

Коэффициенты R

> 0,999 (табл. 1 и 2). Для рутинного анализа,

трехточечной калибровки был использован, применяя в двух экземплярах низкой

Est, средней и высшей точкой каждой калибровки на ВЭТСХ

пластину.

3.2.2. Точность и плавность

Повторяемость определяли анализом и того же образца

(N = 6) на той же пластинке, показывая относительное стандартное отклонение

0,9% рибофлавина, 0,8% пиридоксина, 1,1% для nicoti-

namide, 1,5% кофеина и 0,9% для таурин. Восстановление и

промежуточный точность пять соединений рассчитывали

для каждого соединения на трех различных уровнях по всему Typ-

ческих соответствующих целевых значений в напитках. Уровни

были подготовлены в день в течение трех дней и количественно в трип-

licate каждый день. Для пики, коммерчески доступный напиток

использовался как контрольный образец, который как раз содержал кофеин. Таким образом,

кофеин восстановление шипами образцов рассчитывали

вычитания начальное содержание кофеина. Восстановление пять

соединений на трех уровнях были от 81 до 106%

(Табл. 3). Промежуточное уточнения показали следующие отн-

Ative стандартные отклонения для пяти соединений из самых низких

до самого высокого уровня с шипами: 7,4, 4,5 и 3,6% для рибофлавин,

2,8, 6,3 и 6,2% для никотинамид, 4,4, 2,5 и 4,4% для CAF-

Feine, 2,9, 2,1 и 2,7% для таурин и 0,5, 2,0 и 4,0% за

пиридоксина.

3.2.3. Предел обнаружения и количественного

В соответствии с рекомендациями ICH [57] обнаружение и quantifi-

катионов пределы были рассчитаны на основе калибровочной кривой

и экспериментально проверены. Рассмотрение заявления об-

UME 10 л, обнаружения и количественного ограничения были:

0,11 и 0,22 мкг / мл (1 и 2 нг / банды) рибофлавин, 3,09

и 6,19 г / мл (31 и 62 нг / банды) никотинамид, 2,23

и 4,45 г / мл (22 и 45 нг / банды) кофеина, 4,10 и

8,19 г / мл (41 и 82 нг / банды) и таурин 2,29 и

4,58 г / мл (23 и 46 нг / банды) пиридоксин, соответственно.

3.2.4. Прочность

Во время разработки метода нескольким параметрам были оцен-

ated в отношении надежности. Подвижная фаза состоит из полярных

и неполярные компоненты, а также высокие и низкие летучие,

Кроме того, оно содержит кислоту. Таким образом, необходимо было

использовать свежеприготовленный подвижной фазы. Хроматографии было

не зависит от температуры между 18 и 25

◦

С. Во время

Эксперименты, относительной влажности варьировали между 18 и

50% без влияния на селективность. Различные много пластине

же производителя не имели никакого влияния на хроматографической

разделения.

3.3. Анализ имеющихся в продаже образцов

Десять различных энергетических напитков и шесть различных напитков Кон-

содержащих кофеин, во всех, принадлежащих к различным много восемь брендов

Таблица 3

Восстановление соответствующие соединения в напитке шипами на трех различных уровнях

Восстановление

Уровень 1 (мг/100 мл)

Среднее ± SD

(%)

Уровень 2 (мг/100 мл)

Среднее ± SD

(%)

Уровень 3 (мг/100 мл)

Среднее ± SD

(%)

Рибофлавин

0,32

90,72 ± 6,70

0,64

88,21 ± 4,00

0,80

96,34 ± 3,42

Никотинамид

4,05

81,55 ± 2,31

8,09

83,08 ± 5,26

10.12

85,44 ± 5,26

Кофеин

31,84

106,25 ± 4,62

63.68

103,69 ± 2,60

79.60

105,74 ± 4,69

Таурин

200,09

103,02 ± 3,02

400,17

102,11 ± 2,18

500,22

99,78 ± 2,64

Пиридоксин

1,65

92,32 ± 0,49

3,30

96,83 ± 1,92

4,13

96,41 ± 3,82

Стандартное отклонение.

Страница 5

М. Аранда, Г. Morlock / J. Chromatogr. 1131 (2006) 253-260

Рис. 2. Несколько обнаружения (УФ, видимого и FLD) той же дорожке образца с приложением объемом 10 л энергетические напитки, показывающий никотинамид (7,24 мг/100 мл)

рибофлавин (0,63 мг/100 мл) и пиридоксина (2,08 мг/100 мл). Таурин (373,75 мг/100 мл) количественно, применяя 1 л разбавленного раствора, как описано в разделе

2. Кофеин была определена применением 2,5 л; никотинамид был обнаружен при = 261 нм (как данные не показаны).

имен, были проанализированы. рис. 2 S хау аналоговые кривые Typ-

ческих образца, полученного мульти-длина волны детектирования. Таблица 4

приведены значения приведены в соответствующих выборок для каждого

Соединение по сравнению с заявленным целевых значений. Значения

найдены и утверждал, сопоставлены во всех случаях, за исключением рибофлавина

Содержание EE и RB-образцами уровня найти в первой

была в 10 раз выше, чем меченого значение и во втором

theriboflavincontentwasnotlabeledatall.Usingthischromato-

graphicsystemnotanyinterferencewasobserved.Energydrinks

также содержат высокие уровни углеводов и некоторых других ком-

фунтов, как пантотеновая кислота и витамин В

. Углеводы

не помешать обнаружению, так как они не поглощают в

УФ-области, а также пантотеновую кислоту, которая только показал

Плохо поглощения при 204 нм. Наконец, витамин В

присутствовал в

Таблица 4

Анализ коммерчески доступных образцов: среднее значение (п = 4; ± стандартное отклонение) по сравнению с меченым один (в скобках)

Образцы

Рибофлавин (мг/100 мл)

Никотинамид (мг/100 мл)

Кофеин (мг/100 мл)

Таурин (мг/100 мл)

Пиридоксин (мг/100 мл)

Мегабайт

0,66 ± 0,03

(0,60)

7,24 ± 0,02

(8)

29,92 ± 0,45

(32)

373,75 ± 2,52

(400)

2,08 ± 0,13

(2)

ЕС

Северная Дакота

(0.00)

Северная Дакота

(0)

26,88 ± 0,42

(25)

14,94 ± 1,91

(LI)

Северная Дакота

(0)

EE

0,59 ± 0,01

(0.06)

7,66 ± 0,15

(8)

32,14 ± 1,72

(32)

405,39 ± 1,29

(400)

1,95 ± 0,38

(2)

RB

0,052 ± 0,002

(0.00)

7,68 ± 0,78

(8)

32,67 ± 0,04

(32)

370,53 ± 8,04

(400)

1,75 ± 0,12

(2)

FH

0,72 ± 0,03

(0,60)

8,04 ± 0,75

(8)

32,45 ± 0,24

(32)

401,77 ± 6,03

(400)

2,22 ± 0,25

(2)

Небраска

Северная Дакота

(0.00)

Северная Дакота

(0)

51,76 ± 3,93

(54)

Северная Дакота

(0)

Северная Дакота

(0)

CC

Северная Дакота

(0.00)

Северная Дакота

(0)

9,44 ± 0,03

9,6

Северная Дакота

(0)

Северная Дакота

(0)

ПК

Северная Дакота

(0.00)

Северная Дакота

(0)

12,38 ± 0,25

10,6

Северная Дакота

(0)

Северная Дакота

(0)

Описанных в литературе. ND, не обнаружено; Л.И., помечены, но содержание не было перечислено.

Page 6

М. Аранда, Г. Morlock / J. Chromatogr. 1131 (2006) 253-260

Рис. 3. Масс-спектры никотинамид (А), пиридоксин (B) и рибофлавин [CH

OH] (С), полученный ВЭТСХ / ESI-МС.

Page 7

М. Аранда, Г. Morlock / J. Chromatogr. 1131 (2006) 253-260

Рис. 4. Масс-спектры таурина (А), и кофеина (B), полученного ВЭТСХ / ESI-МС.

образца на низком уровне (20 нг / мл), который не мог быть обнаружен

этим методом.

3.4. Идентификация по ВЭТСХ / MS

Все соединения онлайн извлекается из пластины и после

ESI, recordedinthepositiveandnegativeionmode. Figs.3and4

показать ESI

+

Масс-спектры никотинамид, кофеин и пири-

doxine, в которой [M + H]

+

ионы были обнаружены при м / з 123,

195 и 170, соответственно, а также ESI

-

масс-

спектра для таурин с [M - H]

-

иона с м / з 124. В

случае рибофлавин, без хроматографического развития

[M + Na]

+

ион был обнаружен при м / з 399 и после разработки-

ния [M - CH

OH + H]

+

с м / з 345 предположив метанола

потери при развитии вызванного кислой подвижной фазы.

Молекула изменение было подтверждено 2D планарной хроматографии

с и без кислоты в подвижной фазе. Это молекулярное

изменение отразилось как, стандартные и образцов, без потери

собственной флуоресценции и, следовательно, оценка не была затронута.

Фрагмент при м / з 152 в пиридоксин спектр показал

типичный потерю воды. Небольшие фрагменты в другом спектры

были вызваны слоя материала или растворителей.

Дата добавления: 2015-05-09