Практичне заняття №1

Тема: «Організація бактеріологічної лабораторії. Барвники і прості методи фарбування мікроорганізмів. Мікроскопія»

Бактеріологічна лабораторія – це найважливіша структура в системі мікробіологічної діагностичної служби практичних лікувальних та діагностичних закладів охорони здоров’я.

Протягом вивчення медичної мікробіології, вірусології та імунології студенти навчаються в учбових бактеріологічних лабораторіях, які оснащені на кафедрі аналогічно практичним лабораторіям. Тому на першому занятті важливо вивчити структуру бактеріологічної лабораторії, її оснащення, організацію робочого місця лікаря-бактеріолога. Крім того студентам надається можливість оволодіти одними із найбільш поширених мікробіологічних методів – виготовлення бактеріальних препаратів із чистих культур мікроорганізмів, фарбуванням бактерій простими методами із застосуванням анілінових барвників та мікроскопії з використанням імерсійних об’єктивів. Все це зумовлює актуальність теми заняття та спрямоване на формування позитивної мотивації її вивчення.

· Аналізувати структуру та функції бактеріологічної лабораторії, її місце в системі практичних лікувальних та діагностичних закладів охорони здоров’я.

· Оволодіти методикою виготовлення бактеріальних препаратів із чистих культур бактерій з використанням простих методів фарбування.

· Засвоїти методику мікроскопії бактеріальних препаратів з використанням імерсійних об’єктивів.

3. Базові знання, вміння, навички, необхідні для вивчення теми (міждисциплінарна інтеграція)

Назви попередніх дисциплін	Отримані навики

Анатомія людини	Аналізувати інформацію про будову тіла людини, системи, що його складають, органи і тканини
Гістологія, цитологія, ембріологія	Інтерпретувати мікроскопічну та субмікроскопічну структуру клітин
Медична і біологічна фізика	Трактувати загальні фізичні та біофізичні закономірності, що лежать в основі біологічних процесів.
Медична біологія	Пояснювати на молекулярно-біологічному та клітинному рівні закономірності біологічних процесів

Медична хімія	Трактувати загальні фізико-хімічні закономірності, що лежать в основі процесів розвитку клітин

4. Завдання для самостійної роботи під час підготовки до заняття.

4.1. Перелік основних термінів, параметрів, характеристик, які повинен засвоїти студент при підготовці до заняття:

Термін	Визначення

Медична мікробіологія, вірусологія та імунологія	Медична мікробіологія, вірусологія та імунологія – це навчальна дисципліна, сукупність наук про походження, еволюцію та властивості патогенних для людини мікроорганізмів, нормальної мікрофлори тіла людини, закономірності взаємодії мікроорганізмів з макроорганізмом, імунну систему та механізми протиінфекційного імунітету, методи діагностики, принципи лікування та специфічної профілактики інфекційних захворювань.
Бактеріологічна лабораторія	Бактеріологічна лабораторія – це первинний підрозділ в системі мікробіологічної служби практичних лікувальних та діагностичних закладів охорони здоров’я.
Матеріал	Матеріал – це субстрати, тканини (гній, мокротиння, кров, сеча, фекалії, біоптати тканин тощо), які беруть у хворого чи об’єктів зовнішнього середовища для дослідження з метою виявлення збудників захворювань або антитіл до них (в сироватці крові), тобто для постановки діагнозу інфекційної патології, або виявлення збудників в навколишньому середовищі.
Препарат-мазок	Препарат-мазок готують на предметному склі із матеріалу або чистих культур мікроорганізмів і досліджують у мікроскопі з метою виявлення збудників захворювань чи дослідження їх морфологічних і тинкторіальних властивостей. Препарат-мазок із бактерій ще називають бактеріальним препаратом.
Анілінові барвники	Анілінові барвники – це похідні аніліну, які використовують для фарбування мікроорганізмів з метою збільшення їх контрастності та подальшої мікроскопії.

Імерсійна система	Імерсійна система складається з імерсійного об’єктиву (х 90) та імерсійного масла, яке забезпечує концентрацію променів, що проходять через мікроскопічний об’єкт в об’єктив і, таким чином, забезпечує кращі умови для дослідження мікроорганізмів.

· Структура бактеріологічної лабораторії, призначення різних підрозділів.

· Організація та оснащення робочого місця лікаря-бактеріолога.

· Методика виготовлення бактеріального препарату-мазку.

· Анілінові барвники та приготування фарбуючи розчинів для фарбування мікроорганізмів.

· Прості та складні методи фарбування мікроорганізмів.

· Світловий мікроскоп, будова, призначення окремих частин.

· Визначення збільшення та роздільної здатності мікроскопа. Імерсійна система.

4.3. Практичні завдання, які виконуються на занятті:

· Ознайомитись з принципами організації бактеріологічної лабораторії та правилами роботи в ній.

· Вивчити барвники і фарбуючи розчини, які використовуються в мікробіології.

· Засвоїти методику виготовлення бактеріологічного препарату і фарбування простими методами.

· Оволодіти методами мікроскопічного дослідження бактеріологічних препаратів з використанням імерсійного об’єктиву.

На практичному занятті студенти вивчають структуру бактеріологічної лабораторії, правила роботи в ній, організацію робочого місця лікаря-бактеріолога, готують мазки із чистих культур стафілокока та кишкової палички, фарбують мазки простими методами (метиленовим синім та фуксином), вивчають методику мікроскопії бактеріальних препаратів із використанням імерсійного об’єктиву. Виконані завдання студенти записують у протокол та підписують його у викладача.

Правила роботи в учбовій мікробіологічній лабораторії

У мікробіологічних лабораторіях працюють з матеріалом, що містить мікроорганізми. У зв’язку з цим необхідно дотримуватись правил роботи, які забезпечують її стерильність і запобігання можливості виникнення внутрішньо лабораторних заражень:

1. В лабораторію можна входити в халаті і шапочці.

2. Забороняється вносити в лабораторію сторонні речі.

3. Кожний студент повинен працювати на своєму робочому місці.

4. Робоче місце необхідно утримувати в чистоті.

5. Матеріал для практичної роботи одержує черговий у лаборантській кімнаті і роздає студентам групи в присутності викладача.

6. Використані в роботі інфіковані матеріали, пробірки з культурами бактерій необхідно знезаразити, для чого черговий здає відпрацьований матеріал у лаборантську.

7. Якщо випадково розіб’ється посуд з заразним матеріалом, чи розіллється рідкий заразний матеріал, студент повинен негайно сповістити викладача і разом з ним знезаразити інфіковане місце.

· Здати черговому матеріал, одержаний на початку заняття;

· Здати весь відпрацьований матеріал, який підлягає знезараженню, а також свої посіви у термостат;

· Привести в порядок робоче місце, продезінфікувати його;

· Вимити руки дезінфікуючим розчином і милом.

9. Черговий студент контролює порядок на робочих місцях студентів в групі і здає у лаборантську все, що одержав для роботи на початку заняття.

Організація робочого місця лікаря-бактеріолога

4. Пробірка з стерильним фізіологічним розчином.

17. Дозатори і набори стерильних наконечників.

Методика виготовлення бактеріального препарату-мазку

1. Приготування суспензії бактерій на предметному склі.

2. Висушування суспензії бактерій та одержання мазку.

3. Фіксація мазку. Мета фіксації: вбити мікроби, закріпити їх на склі і забезпечити краще їх фарбування.

Для фарбування мікроорганізмів використовують анілінові барвники. Це, в основному, похідні органічних сполук (аніліну та інших). Це порошки, які не розчиняються у воді, але добре розчиняються в органічних розчинниках (спирт, ацетон). Для фарбування мікроорганізмів використовують спиртово-водні розчини.

Анілінові барвники бувають: основні, кислі та нейтральні. Для фарбування бактерій використовують основні барвники. Методи фарбування мікроорганізмів є прості і складні. Прості – коли використовують 1 барвник. Складні – використовують 2 та більше барвників, або 1 барвник та речовини, які не фарбують мікроби, але приймають участь у процесі фарбування.

Колір	Основні	Кислі
Червоний	Нейтральний червоний Фуксин Сафранін Піронін	Кислий фуксин Еозин
Фіолетовий	Генціанвіолет Кристалвіолет
Синій	Метиленовий синій
Зелений	Малахітовий зелений Бриліантовий зелений
Чорний	Інулін	Нігрозин
Жовтий		Конго Аурантія
Коричневий	Хризоїдин

Схема промінів при сухій (А) і масляній (Б) системах;

1-фронтальна лінза об’єктиву; 2-імерсійне масло; 3-предметне скло.

Завдання №1. Приготувати бактеріальні препарати із коків та паличок, пофарбувати простими методами, дослідити в мікроскопі.

· Яка структура бактеріологічної лабораторії та яке призначення її підрозділів?

· Які властивості мікроорганізмів можна дослідити при мікроскопії пофарбованих препаратів?

· Як готують фарбуючи розчини із анілінових барвників?

· З якою метою роблять фіксацію мазків на предметному склі?

· Яким об’єктивом користуються при мікроскопії бактеріальних препаратів? Які ознаки такого об’єктиву?

· Як розрахувати загальне збільшення мікроскопа?

· Що таке роздільна здатність мікроскопа і чому вона дорівнює?